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染色体畸变试验的方法

版块:描文本外链   类型:普通   作者:wjunxi   查看:5514   回复:0   获赞:0   时间:2021-12-13 15:11:30

 染色体畸变是基因突变的一种形式,通常后果比较严重。可用外周血淋巴细胞,或人和哺乳动物体细胞系作为材料进行检测,常用的体细胞系有中国地鼠卵巢细胞(CHO),中国地鼠肺成纤维细胞(V79和CHL),人胚肺2倍体成纤维细胞等。

  一、染色体畸变试验原理

  外周血中小淋巴细胞几乎都处在细胞增殖周期的G。期或G。期(不同于体外培养的体细胞)。一般条件下是不会再分裂的。当在培养物中加入适量的植物血凝素(phytohernagglu—tinin,PHA),37℃培养52~72h后,淋巴细胞开始转化,进入细胞增殖周期,此时可获得大量的有丝分裂细胞。再经过秋水仙素处理,低渗、固定,即可在显微镜下观察到良好的中期染色体分裂象。电离辐射,化学有害物质作用于机体或体外细胞,均可引起细胞染色体的损伤,且损伤与剂量(浓度)呈良好的线性关系。

  染色体畸变试验

  二、材料与方法

  (一)染色体畸变试验材料

  1.受试材料:外周血淋巴细胞。

  2.RPMI 1640培养液,含20%小牛血清。

  3.肝素:用生理盐水配成500U/ml,4℃冰箱内保存备用。

  4.秋水仙素:用0.85%生理盐水配成40μg/ml浓度,过滤后4℃冰箱保存。

  5.促细胞分裂剂:植物血凝素(PHA)。

  6.KCl低渗液:配制75mmol/L KCl水溶液。

  7.固定液(甲醇:冰醋酸=3:1)。

  (二)染色体畸变试验方法

  1.受试物的处理实验分组,至少设立五个组,即阳性对照、阴性(溶剂)对照及三个剂量组。zui高剂量和zui低剂量之间相差10倍,中间再设一个剂量,阳性对照物为已知的染色体断裂剂,如C(mitomycin c,MMC),剂量为o.02μg/ml;黄曲霉素毒素Bl,浓度为10-6 M等。每组中应设2~3个平行样品。


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