一、细胞简介：

　　细胞称号：人胚胎干细胞H1（STR判定）

　　渠道编号:zl-055911

　　细胞描绘：人胚胎干细胞，曾用名WA01

　　形状：球形克隆，贴壁成长

　　来历性别：男性

　　安排：内细胞团

　　冻存日期/代数：详见冻存管/培育瓶标识

　　主张复苏培育系统：1个T25培育瓶或6cm培育皿

　　细胞状况：杰出

　　支原体检测成果：阴性

　　细胞用处：仅供科研运用

　　二、培育基预备：

　　H1细胞彻底培育基培育人胚胎干细胞

　　1.试剂和资料

　　H1细胞彻底培育基试剂盒

　　H1细胞基础培育基500mL1瓶2-8℃

　　H1细胞培育基增加剂20ml1支-20℃

　　所需的其它试剂和资料

　　Y276321mg

　　Matrix5mL

　　H1细胞消化液500mL

　　另需细胞培育皿/瓶/板，15mL离心管和移液管等细胞培育耗材

　　三、培育流程：

　　复苏

　　在开端复苏前，将一切试管、预热后的培育基和培育皿预备好，已保证赶快完结复苏进程。

　　1.将冻存管从液氮中取出，快速在37℃水浴槽中冻结，轻柔继续地摇摆冻存管，直到只剩下一个小冷冻团。从水浴槽取出冻存管，70%乙醇擦洗进行消毒。

　　2.运用移液管将冻存管中含有H1细胞的冻存液悄悄搬运至一个含有5-6mL现已预热的彻底培育基的15mL离心管中，进程有必要轻柔避免吹散细胞团。

　　3.室温300g离心5min。

　　4.吸出培育基，保证细胞团完好。

　　5.然后缓慢参加1mL彻底培育基，用手指轻弹离心管底部，使细胞团脱离底部并涣散。

　　6.悄悄的将此1mL细胞悬液搬运至已包被的培育皿/板/瓶，根据终究培育细胞的液体体积，参加ROCKinhibitorY27632，终浓度为10μM。

　　7.将培育皿/板/瓶置于37℃培育箱中，每天替换培育基（换液不需求再增加Y27632，但培育基需提早预热）。

　　传代

　　当集落变得较大、中心变得密布、亮堂（比照边际），相邻的集落开端融合时，此刻可进行传代。

　　1.传代前，预备37℃预热好的好无钙镁PBS溶液及消化液，彻底培育基。

　　2.吸走上清，并参加37℃预热好的PBS溶液清洗1次。

　　3.参加适量（按6孔板每孔加1ml，6cm皿加2ml，10cm皿加3ml的量）的37℃预热好的消化液。

　　4.37℃放置1-2min，用手指轻弹皿/板/瓶身，显微镜下调查到大部分克隆边际开端脱离培育皿/板底，克隆内部大部分细胞成团掉落。

　　5.参加适量的彻底培育基停止消化。

　　6.移入离心管，300g离心5min，

　　7.离心后重悬（重悬过程参照复苏4-5步）。

　　8.传代份额为1：6—1：8，根据终究培育细胞的液体体积，参加ROCKinhibitorY27632，终浓度为10μM。

　　9.将培育皿/板/瓶置于37℃培育箱中，每天替换培育基（换液不需求再增加Y27632，但培育基需提早预热）。

　　冻存

　　当集落变得较大、中心变得密布、亮堂（比照边际），相邻的集落开端融合时，此刻可进行传代。

　　1.传代前，预备37℃预热好的好无钙镁PBS溶液及消化液，彻底培育基。

　　2.吸走上清，并参加37℃预热好的PBS溶液清洗1次。

　　3.参加适量（按6孔板每孔加1ml，6cm皿加2ml，10cm皿加3ml的量）的37℃预热好的消化液。

　　4.37℃放置1-2min，用手指轻弹皿/板/瓶身，显微镜下调查到大部分克隆边际开端脱离培育皿/板底，克隆内部大部分细胞成团掉落。

　　5.参加适量的彻底培育基停止消化。

　　6.移入离心管，300g离心5min。

　　7.离心后重悬（重悬过程参照复苏4-5步）。

　　8.运用预冷的冻存液悄悄的重悬细胞团，然后将细胞悬液搬运至冻存管，冻存按6孔板每孔冻1支，6cm皿冻2-4支，10cm皿冻6-12支（冻存液为：90%H9细胞彻底培育基与10%的DMSO。

　　四、留意事项

　　1.收到细胞后，若发现干冰已蒸发洁净、冻存管瓶盖掉落、破损及细胞有污染，请当即与咱们联络。

　　2.收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦洗酒精后放在培育箱静置2-4小时（视细胞密度而定）安稳细胞状况。接着在倒置显微镜下调查细胞成长状况，并对细胞进行不同倍数摄影（主张收细胞时就全体外观拍一张相片，调查培育基的色彩和是否有漏液状况，随后在显微镜下拍下细胞状况，100*，200*各一张），调查记载细胞在运送进程中是否有污染状况。作为我方进行出售根据。

　　3.因为细胞状况受环境、操作和运送等多方面要素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状况，故客户需求售后时需出示收到细胞的时刻证明及客户供给收货时刻和发现问题后客服人员交流的时刻证明，期间间隔时刻不能大于7天。

　　4.一切动物细胞均视为有潜在的生物危害性，有必要在二级生物安全台内操作，并请留意防护，一切废液及触摸过此细胞的器皿需求灭菌后方能丢掉。

　　智立中特（武汉）生物科技有限公司是一家集生物研制，出产，出售，售后为一体的高新技术产业公司。具有载体质粒，载体，国内外微生物菌种资源，感受态细胞，培育基，细胞株等广泛的出产出售线。

　　质粒载体产品：

　　供给各种类型载体宿主，基因种属类型，抗性，规划并构建质粒：大肠杆菌表达载体；哺乳动物表达载体；酵母表达载体；昆虫表达载体；植物表达载体；广;腺病毒载体...常用有pACYC184；pACYCDuet-1；pASK-IBA5plus+FUS(人基因）；pAX01；pBABE-Puro；pBAD24

　　pBI121；pBIFC-bFosVC155；pBIFC-VC15；pCDFDuet-1；pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro；pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP-T2A-puro；pBIFC-VN155(I152L)addgene27097；pCDH-MSCV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro；pCAGGS；pBiFC-VN173(Plasmid#22010)；pBlueScriptSK(+)；pBlueScriptIISK(+)；pBV220；pCas；pCas9

　　pBR322；pBT3-STE；pBudCE4.1以及结合搬运质粒RP4；pGL4.25[luc2CP/minP];pGR106;pIRES2-AcGFP1-Nuc;psfGFP;pHEN1;pNL1.1[Nluc];pBBR1-GFP；pBMTB-5;pBMTB-4;pBMTB-3;pBMTB-2;pCAMBIA0305.1;pCX-DR;;pGreenII0800-miRNA;pK7GWIWG2(I);pRARE;pDG1663

　　质粒菌种产品：

　　E.coliNissle1917；USA300：大肠杆菌JM108；希瓦氏菌属MR-1；E.coliW3110野生型；酿酒酵母W303a；酿酒酵母invsc1；酿酒酵母BY4741；酿酒酵母BY4742；毕赤酵母SMD1168H；PseudomonasputidaKT2440；E.coliMC1061；枯草芽孢杆菌WB800；根癌农杆菌EHA105；根癌农杆菌GV3101；CEN.PK2-1D；CEN.PK2-1C；全耐药鲍曼不动杆菌；哈维弧菌BB170

　　菌种产品：

　　供给方式菌种，科研菌种，一般菌种等菌种资源，有证质控样品等微生物规范品，芽孢悬液。常用药典菌种如：大肠埃希氏菌CMCC（B）44102、黑曲霉CMCC（F）98003,白色念珠菌CMCC(F)98001,枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501,铜绿假单胞菌CMCC（B）10104,生孢梭菌CMCC（B）64941;常用益生菌：长双歧杆菌（Bifidobacteriumlongum）,嗜热链球菌（Streptococcusthermophilus），鼠李糖乳杆菌（Lactobacillusrhamnosus），类干酪乳杆菌（Lactobacillusparacasei），干酪乳杆菌（Lactobacilluscasei）；常用真菌：松口蘑Tricholomamatsutake，灰葡萄孢bio-81601cfcc50437Botrytiscinerea；灵芝，香菇，茯苓等

　　原代细胞和细胞系产品：

　　现取不同安排现分：不同来历人/鼠/兔/猪等不同安排如肺、气管、支气管、甲状腺、胰腺、垂体、肾上腺、扁桃体、胸腺、肾、膀胱、输尿管、前列腺、心脏、血管。常用原代细胞有：气管上皮细胞；前列腺上皮细胞；膀胱上皮细胞；输尿管上皮细胞；肾足细胞；内皮祖细胞；输卵管上皮细胞；乳腺上皮细胞

　　公司供给细胞系人源做过STR判定，其他做过种属判定，保证产品无误后方可供给客户，方式冻存或复苏节约客户时刻；保证试验顺畅。常用细胞系有：WB-F344细胞；RG2[D74]细胞；NRK细胞；A7r5细胞；L6细胞；UMNSAH/DF-1细胞；MDBK(NBL-1)细胞；MDBK细胞；CCC-SMC-1细胞；PtK1(NBL-3)细胞；Mv1Lu细胞；Mv.1.Lu(NBL-7)细胞；F81细胞；CRFK细胞；MLTC-1细胞；MS1细胞；C3H/10T1/2,Clone8细胞；GL261细胞；P3X63Ag8.653细胞；HCC38细胞；ZR-75-30细胞；SK-LU-1细胞；NCI-H2087细胞；SK-N-MC细胞；Hs895.T细胞