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对蛋白亚细胞定位的认知或许标明,蛋白或许在许多细胞进程中发挥作用。如果与下面所列的其间一种细胞器特异性试剂共定位,那么可承认意图蛋白的亚细胞方位。尽管这些细胞器符号物可用作强壮的免疫荧光东西,但它们还可用作碎裂细胞裂解物的蛋白质印迹对照。
这些蛋白的表达或许在不同细胞和安排中有所不同。
荧光蛋白的发光原理在于其发色基团经必定波长的光(激起光)照耀后被激活,并将能量以光能方式开释,这时咱们就能在荧光显微镜下看到日思夜想的荧光色啦!
但由于能量不能全以光的方式辐射出来,所以荧光蛋白的发射光(荧光)的波长比激起光长。
那么咱们是怎样将荧光蛋白分类的呢?一般,人们按发射波长来分类并界说其色彩(下图)。
RFPs(赤色荧光蛋白):
mCherry具有优异光安稳性,通用赤色单体(但交融表达时有较弱的齐聚效应)
tdTomato具有mCherry相同的光安稳性,亮度强,是追寻表达水平的抱负挑选,但为串联二聚体,能够在交融标签巨细不搅扰蛋白质功用的情况下运用
mStrawberry信号亮的赤色单体,但光安稳性要弱于mCherry
DsRed是细胞毒性小的RFP
mApple在蛋白的交融表达中是mCherry不错的代替物,但其光安稳性要远弱于mCherry
mKate2从参数方面考量是归纳亮度、光安稳性和齐聚性的RFP。
OFPs(橙色荧光蛋白):
mOrange橙色单体
YFPs(黄色荧光蛋白):
mVenus是亮度极高的黄色单体
GFPs(绿色荧光蛋白):
EGFP
BFPs(蓝色荧光蛋白):
mTagBFP2安稳,老练快、亮度极亮的蓝色单体
上面是通用一些荧光蛋白参数,再好的载体也需求找对适宜的光源,光源的挑选关于载体信号的激起也是不可或缺的,美国LUYOR公司实验室仪器事业部致力于研讨和开发荧光观测配备,其产品系列有LUYOR-3415RG双荧光蛋白观测灯,LUYOR-3430、LUYOR-3260单荧光蛋白观测手电筒。荧光是各式各样细胞生物学、神经体系学及其他范畴研讨中的一种强壮和广泛运用的东西。LUYOR的LUYOR-3415RG和LUYOR-3430、LUYOR-3260除了可用于挑选转基因生物外,还能够用于样本的预挑选、辅佐解剖、用于珊瑚研讨等
LUYOR-3415RG双荧光蛋白调查灯的用处:
用于检测、挑选转绿色荧光蛋白(GFP)和赤色荧光蛋白(DsRed)基因的植物、动物及微生物,如水稻、玉米、斑马鱼、小鼠、细:菌、真菌等等...
LUYOR-3415RG双荧光蛋白调查灯的产品优势:
1. 大功率输出,无需暗室,也可轻松激起荧光。
2.检测效率高,黑私自检测一望而知
3.LED寿数50000h,且体系安稳,可长期运用
4.直接检测,而无需用底物显色,所以安全,对被检测目标无损伤
激起光源激起出绿色荧光时,用黄色滤光镜观测,可检测含绿色荧光蛋白(GFP)的生物;激起光源激起赤色荧光时,用赤色滤光镜观测,可检测含赤色荧光蛋白(DsRed)的生物。
注:
1. LUOYR-3415R用于观测绿色荧光蛋白
GFP:绿色荧光; fluorescein荧光素
2. LUOYR-3415C用于观测黄色荧光蛋白
YFP:黄色荧光蛋白; Venus:金色; Lucifer Yellow:荧光黄
3. LUOYR-3415G用于观测赤色荧光蛋白
DsRed:赤色荧光蛋白; TdTomato:西红柿红
4. LUOYR-3415V用于观测紫色荧光蛋白
CFP:青色荧光蛋白; BFP:碱性胎儿蛋白
5. LUOYR-3415U用于观测:
DAPI:蓝色荧光
LUYOR-3415荧光蛋白激起光源的物理技术参数:
波长:可任意挑选2种波长:365nm,400nm, 450nm, 485nm,520nm
质量:毛重0.9kg,毛重:4kg,尺度:180x200mm(长x高),头部直径120mm。
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