一、细胞简介：

　　细胞称号：SW1116人结肠腺癌细胞

　　渠道编号:zl-056648

　　CSAp阴性(CSAp-)。结肠抗原3，阴性。角蛋白免疫过氧化物酶染色阳性。癌基因c-myc,K-ras,H-ras,myb,sis和fos的表达呈阳性。未检测到癌基因N-myc和N-ras的表达。表达肿瘤特异的核基质蛋白CC-4，CC-5和CC-6。

　　细胞特性

　　1）来历：结肠腺癌

　　2）形状：上皮细胞样，贴壁成长

　　3）含量：>1x106细胞数

　　4）标准：T25瓶或许1mL冻存管包装

　　5)用处：仅供科研运用。

　　二．细胞的培育：

　　1）L-15培育基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

　　留意：细胞成长很慢，到达80%密度时主张传代和冻存细胞。

　　2）培育条件：气相：空气，100；该细胞培育不能通入CO2，假如没有条件预备空气气相100的培育箱的，能够选用不透气密封盖的T25培育瓶来培育，培育进程中每天将细胞拿出培育箱换1-2次空气。温度：37摄氏度，培育箱湿度为70%-80%。

　　3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

　　三．细胞处理：

　　1）冻存细胞的复苏：

　　将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中敏捷摇晃冻结，参加到含4-6mL彻底培育基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，彻底培育基重悬细胞。然后将细胞悬液参加含6-8ml彻底培育基的培育瓶（或皿）中37℃培育过夜。第二天显微镜下调查细胞成长状况和细胞密度。

　　2）细胞传代：假如细胞密度达80%-90%，即可进行传代培育。

　　关于贴壁细胞传代能够参阅以下办法：

　　1.弃去培育上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

　　2.参加0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53mMEDTA于培育瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培育箱中消化1-2分钟（难消化的细胞能够恰当延伸消化时刻），然后在显微镜下调查细胞消化状况，若细胞大部分变圆并掉落，敏捷拿回操作台，轻敲几下培育瓶后参加3-4ml含10%FBS的培育基来停止消化。

　　3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培育液后吹匀。将细胞悬液按1：2的份额分到新T25瓶中，增加6-8ml依照说明书要求装备的新的彻底培育基以坚持细胞的成长生机，后续传代根据实际状况按1:2~1:5的份额进行。

　　3）细胞冻存:收到细胞后主张在培育前3代时冻存一批细胞种子以备后续试验运用。

　　四、运送和保存

　　干冰运送及复苏好存活细胞

　　（1）1mL冻存管包装干冰运送，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已蒸发洁净、冻存管瓶盖掉落、破损及细胞有污染，请当即与咱们联络。

　　（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后依照细胞接纳后的处理办法操作。

　　细胞接纳后的处理

　　1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培育箱放置约2-3h，若发现培育瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请摄影后及时联络咱们。

　　2）请在4或5X显微镜下承认细胞状况，一起给刚收到的细胞摄影（10×，20×）各2-3张以及培育瓶外观相片一张留存，作为售后时收届时细胞状况的根据。

　　3）贴壁细胞：细胞在37℃培育箱中放置2-3h，显微镜下调查细胞的成长和贴壁状况，有些贴壁细胞在快递运送进程中会因振荡掉落和掉落后成团的状况。若镜下调查细胞的成长密度若在60%以下，可去除培育瓶中灌液培育基（若有未贴壁的细胞需求离心收回，重悬打入到原培育瓶中）,参加新制造的彻底培育基6-8mL，放到细胞培育箱中持续培育。若细胞成长密度达70%-80%以上，能够对细胞进行传代处理。传代进程中，若因运送振荡掉落的细胞需求离心收回。

　　4）补白：运送用的培育基（灌液培育基）不能再用来培育细胞，请换用依照说明书细胞培育条件新制造的彻底培育基来培育细胞。收到细胞后传代主张T25培育瓶1：2传代。

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