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试验室数学在生物学试验数据剖析中一直是一个令人头疼的问题?在定量PCR试验中,常常会遇到核算DNA片段中的分子、核算溶液的浓度或核算接连稀释等,这样的核算有没有什么好的办法呢?
当然有了,在本文中,咱们将教你简略的DNA样本中的分子计数法。
——例如,套入公式即可一招轻松拆解:500 ng样本中有多少个50碱基对(bp)片段的模板/副本?这样的扎手问题。使您很快就会成为试验室中的核算高手!
一、核算DNA片段中分子数量的运用
在进行以下类型的试验时,一般需求DNA分子的核算:
DNA衔接。
生化剖析。
实时PCR(肯定定量)。
丈量载体基因组的数量。
二、分子数核算公式的原理
咱们知道,单个DNA bp的均匀分量为650道尔顿。这也能够写为650 g/mol(=摩尔质量)。因而,任何双链DNA片段的分子量或摩尔质量都能够经过将其长度(以bp为单位)乘以650来核算,答案将表明为道尔顿或g/mol。
只需咱们知道序列长度(即基因组的长度/巨细),此核算将适用于任何物种的基因组DNA。
三、实例与运用:
1.实例问题:5.2-kb质粒的分子量是多少?记住5.2 kb = 5200 bp
核算:5200 bp x 650道尔顿= 3,380,000道尔顿或g/mol
现在咱们知道怎么核算DNA模板的分子量了。运用阿伏伽德罗数,即6.022 x 1023分子/摩尔,能够运用以下公式核算每份模板的分子数:
2.实例问题:您有300 ng的5.2-kb质粒。你的质粒有多少复制?
3.实例问题:您有50 ng的20-bp引物。你的引物有多少份?
4.实例问题:您有150 ng的670 bp纯化PCR产品,你有多少份PCR产品?
留意:此公式根据您运用的是单一DNA物种的假定,因而在运用于PCR产品或质粒时,请确保您只需1个条带或您有洁净的质粒小量制备。
所以试验中,只需知道DNA片段的长度和以纳克为单位的浓度,您就能够轻松运用该公式来取得任何类型的DNA样本中的复制数。
四、其他分子量核算常用的公式
假如您有关于DNA片段计数、PCR试验等相关问题,请查找姑苏阿尔法生物试验器件有限公司 进入网站与咱们联络。
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