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细胞成长缓慢的常见原因:
(1)培育基或许缺少细胞成长所需的某种因子。
一般情况下,当小伙伴购买细胞,并没有依照ATCC或国内细胞库引荐的办法制备培育基,运用实验室兄弟姐妹运用的培育基来培育细胞。解决办法一般是依照引荐的办法制备培育基,或直接购买培育细胞的培育基。(B)细菌、支原体、真菌等污染:尽管培育基中一般添加双抗体(青霉素和链霉素),但假如无菌操作观念不强,仍有或许形成污染。处理办法:假如有冷冻细胞,能够丢掉污染细胞。当然,丢掉并不是随意的,扔进垃圾桶。应依照实验室生物安全规则进行。然后复苏培育物,主张培育箱彻底消毒。
(2)假如不冷冻,并且这种细胞十分宝贵,常用的医治办法是药物医治:细菌污染加5-10倍的抗生素;真菌污染加抗真菌药物;支原体污染再加上抗支原体药物,详细药物能够咨询技术支持,他们会愈加专业。
(3)许多细胞的成长依赖于密度。假如传代后细胞密度过小,也会影响细胞成长。这段时刻没有什么特别好的,便是替换液体。假如细胞培育瓶为T75,则能够消化、离心、复苏,然后接种到T25瓶中。
(4)冷冻细胞中添加DMSO(二甲基亚砜)的量不正确,没有逐步梯度冷却。下一次康复后的细胞总是坏的。处理办法:按引荐的冷冻保存办法制备冷冻液。部分细胞合适10% DMSO,部分细胞合适5% DMSO;严厉遵从突变冷却的准则,细胞康复后敏捷冻结。
(5)换液间隔时刻太长。一些小伙伴真的把细胞“佛”系成长。当他们想到它的时分,才会换下液体,信任一个语句。“你已经是一个老练的细胞了。你应该学会养活自己,成长”。在这种情况下,细胞培育瓶中积累了许多的细胞代谢废物,影响细胞活性。
(6)细胞的“消化”时刻不宜过长,削减对细胞的损害;此外,EDTA一般添加到胰腺酶中,螯合钙离子,影响细胞粘附。医治办法:操控细胞“消化”时刻,尽量去除洁净的胰蛋白酶和EDTA。
PH值:细胞需要在必定的PH值下成长,这个小朋友知道。可是许多时分PH值是咱们疏忽的东西,这也是想着重的一点。跟着运用时刻的添加,咱们运用的介质或许会渐渐变成碱性!(当然,它也或许变酸,但改动碱是常见的)。一般来说,过碱的培育基会影响细胞的成长。医治:简略的办法便是替换新鲜的培育基!当然,假如你有时刻和条件,你能够调整介质的pH值。
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