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1 简述
Western Blot（简称WB），蛋白质免疫印迹法，是根据蛋白质SDS-PAGE电泳别离和特异性抗体辨认蛋白的特性，通过显色技能，以到达检测意图蛋白的技能。该技能广泛应用于定性检测蛋白水平的表达，活性剖析与判定。该试验过程多，要害点多，耗时长，每个过程或许都影响终究的成果，所以试验中经常呈现各种问题。本文对WB试验中常呈现的各种问题进行概括总结，并给出相应的处理方法，以便了解WB试验中的留意点和标准操作的必要性，一起对WB呈现的问题剖析和处理供给参阅。
2 试验原理
WB以安排或细胞中的蛋白质为研讨方针，通过SDS-PAGE别离蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键方式吸附蛋白质，且能坚持电泳别离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的一抗起免疫反响，再与酶或同位素标记的二抗起反响，通过底物显色或放射自显影以检测电泳别离的特异性意图基因表达的蛋白成分。
3 试验流程图
图3-1 WB试验流程图
4 常见问题或许原因和处理办法
WB试验过程较多，耗时均较长，且每步都影响终究的成果体现。咱们将常见问题总结概括为5大类，见表4-1。下面将对各问题进行分类总结，并对呈现该现象的原因进行剖析，给出相应的处理办法。
表4-1 常见问题分类
章节 | 问题 |
4.1 | 无信号，没有阳性条带 |
4.2 | 有阳性条带，但条带信号弱 |
4.3 | 条带或方位反常（浅笑条带；蹙眉条带；条带变形；哑铃条带；条带方位反常；条带粘连） |
4.4 | 高布景（均一性高布景；非均一性高布景） |
4.5 | 非特异性条带多 |
4.6 | 其它问题（方针条带是空白，周围有布景；条带中间或周围呈现白影；非均一性布景） |
4.1 无信号，没有阳性条带
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