自噬（autophagy）被认为是坚持细胞稳态的要害进程，也是对等压力源的反响，如养分缺少，这或许会危及细胞的生计。当细胞接触到这些压力源时，原本在低水平发生以平衡生物分子的稳定组成的自噬，就会被大幅度上调。这种上调会添加了细胞的吸收和降解，将大分子释放回胞质中以驱动有必要的代谢反响并发生能量。

在正常和压力条件下，自噬对细胞健康的奉献，意味着这种严厉调控和准确和谐进程的重要生理和病理效果。事实上，自噬在哺乳动物的发育进程中被发现是有用的。此外，最近的研讨发现自噬是各种疾病和病症的重要调节器。探究自噬在发育和疾病中的参加，关于更全面地了解这一途径的效果至关重要，而且或许对坚持健康或医治疾病有影响。

自噬的研讨现已成为现在医学研讨的常客，发文量也非常巨大，成为惯例生物学现象来研讨，但是有一些试验上的技巧值得讨论一二，例如一些试剂的运用等等

1、自噬相关试剂的运用。

①MDC:取12 mg粉末溶于720 nl DMSO使其浓度为50 mmol/L,分装后-20冰箱保存。临用前用MEM稀释到终浓度50 umol/L;

②Rapamycin:用MEM培育基配成终浓度为1 umol/L,现用现配;

400ng/ml喹乙醇:称取4 mg喹乙醇,DMSO预溶(体积<0.1%)后参加10 ml MEM培育液至彻底溶解,现用现配,避光保存;

③3-MA:首先用PBS溶解粉末,临用前加热至彻底溶解后再参加MEM培育基至终浓度10mmol/L;PI3K按捺剂（3-MA，Wortmannin）可搅扰或阻断自噬体的构成；

用RAPAMYCIN诱导自噬我也查过一部分文献，有用无血清的，也有用，一般培育基的，浓度从25nM到100nM都有，用的是50nM的雷帕霉素，参加一般的培育基中，意图是扫除无血清所诱导出来的自噬。

文献说饥饿初期激活的是大分子自噬，在4-6小时生机到达最大，24h后以CMA途径为主

④Earle's balanced salts solution (EBSS) for 48 h

sigma的EBSS，货号E2888，有碳酸氢钠，有酚红的，酚红到不是很有必要，仅仅一个PH指示效果，好看些

⑤无血清诱导自噬：EBSS 诱导6个小时就能够了。

EBSS必定能够诱导出来，仅仅需求阐明的是时刻点的设置，由于从饥饿诱导开端半个小时就或许开端自噬了，一直到24小时都继续，所以应该设置不同的时刻点调查这个效果。别的一个很大的问题是，饥饿诱导的一个很大的坏处是细胞逝世，这也是我面对的问题，便是在细胞收养的时分蛋白浓度太小了。24小时就很少了，更不要说48小时和72小时了。

⑥Hank's诱导，也便是一般所说的饥饿诱导，细胞培育到对数生长期后以Hank's代替惯例彻底培育基，3h后就可诱导出自噬。我用Hank's诱导了3h后电镜调查有30%细胞都有自噬这种现象，但不如国外报导的高。

⑦sigma的氯喹的货号C6628。用氯喹做自噬按捺剂，293T细胞50uM就能够。1. 能够用双蒸水制造2. 制造后4度保存

不同的自噬按捺剂机制不同。按捺的进程也不同。有的不能按捺lc3的剪切，但能按捺后续的进程，Chloroquine按捺自噬体与溶酶体的交融进程，autophgy不能完结，所以lc3才会累积。因而加了按捺剂lc3之后会比不加的要高。氯喹能进步溶酶体中的pH值，使溶酶体中的酸性水解酶损失活性，然后导致“自噬溶酶体”不能降解，因而，坐落自噬体和自噬溶酶体膜上的LC3不能准时降解，表现为LC3荧光长时刻的保存或WB中LC3条带变粗。

⑧Z-VAD-FMK（caspase-3 按捺剂）按捺EV71感染所引起的细胞凋亡，调查细胞的自噬状况。研讨发现，按捺细胞凋亡能添加LC3-I转化为LC3-II以及p62的降解。

1. 雷帕霉素：作为以mTOR 为靶点尤为经典的诱导剂现已被广为运用，引荐作业浓度为1μmol-10μmol；

2. 氯喹：氯喹（Chloroquine）作为溶酶体的按捺剂，能够按捺自噬体与溶酶体的交融然后能够用来作为自噬以及自噬流的按捺剂用于试验研讨，引荐运用浓度：10umol-50umol。

2、自噬诱导剂

正常培育