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Annexin V是一种磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,它经过细胞外侧露出的磷脂酰丝氨酸与凋亡前期细胞的胞膜结合,是检测细胞前期凋亡的活络目标。
ApoScreen®Annexin V是一种在大肠杆菌中表达的重组蛋白。细胞结构的一些改变在细胞凋亡过程中产生。一个首要的改变是膜磷脂不对称性的损失,伴随着磷脂酰丝氨酸的移位(PS)从磷脂双层的内小叶到外外表。Annexin V是钙依赖性磷脂结合蛋白膜联蛋白宗族的成员,对含磷脂酰丝氨酸(PS)的磷脂双层具有高度亲和力。共轭的Annexin V可用于监测细胞膜磷脂不对称性的改变,然后供给了一种检测细胞膜磷脂不对称性的便利东西凋亡细胞。
Annexin V主张的染色计划:
1.在冷PBS中清洗细胞两次
2.在冷1X ApoScreen®中从头运用电池膜联蛋白结合缓冲液(SB目录号10045-01)浓度为1 x 106细胞/mL
3.加100mL细胞悬液至5mL聚苯乙烯圆底管
4.加10m共轭ApoScreen®Annexin V
5.悄悄旋转每根试管,在2-8°C温度下培育15分钟,并避光
6.在不清洗的情况下,增加~380m冷1X ApoScreen®Annexin结合缓冲液到每根管
7.加10mApoScreen®的L7-氨基放丨线丨菌丨素D(7-AAD;SB分类号10042-01)或ApoScreen®碘化丙啶(PI;SB类别号。
Annexin V贮存方法:
1.纯化的(UNLB)ApoScreen®Annexin V以0.1mg纯化的重组蛋白方式从PBS中冻干。贮存资料在重构前的-20°C温度下。用1.0毫升的dH2O从头制造。将再造资料贮存在2-8°C的温度下。
2.荧光素(FITC)、生物素(BIOT)和菁5(CY5)ApoScreen®附录V结合物在1.0毫升的溶液中作为100次实验供给ApoScreen®Annexin V结合缓冲液。在2-8°C下贮存。
3.R-藻红蛋白(PE)和别藻蓝蛋白(APC)ApoScreen®在1.0毫升PBS/NaN3中,以100次实验的方式供给膜Annexin V结合物和安稳剂。在2-8°C下贮存。不要冷冻!
4.维护荧光色素结合物不受光照。假如依照指示贮存,试剂在标签上显现的时间内是安稳的。
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