谷氨酰胺(Gln)含量测定试剂盒分光光度法
分光光度法50管/48样

正式测定前必须取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定含义：
谷氨酰胺（Glutamine）是构成人体蛋白质所必需的20种氨基酸之一。是人体内遍及的、不行短少的条件性必需氨基酸，是构成蛋白质不行短少的氨基酸之一，更是某些细胞培育中最根本的元素。因为谷氨酰胺不稳定的特性，在细胞培育基的整合中，易自发性分解为谷氨酸和氨离子，而氨离子对细胞的毒性很强，因而，在细胞培育系统中，须亲近重视谷氨酰胺的贮存寿数（SHELF LIFE）和实时监测。

测定原理：
在谷氨酰胺酶（Glutaminase）效果下，谷氨酰胺发生脱氨基反响，发生谷氨酸（glutamic acid）和氨离子；
谷氨酰胺+H₂O———————谷氨酸+NH₄⁺
然后用显色剂进行显色，显色后在570nm下进行测定。
谷氨酰胺(Gln)含量测定试剂盒分光光度法
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水。
试剂的组成和制造：
试剂一：液体50mL×2瓶，4℃保存；
试剂二：液体1.5ml×1瓶，-20℃保存；
试剂三，粉剂×1瓶，4℃保存；临用前参加10mL蒸馏水，充沛混匀溶解，用不完的试剂仍4℃保存
谷氨酰胺提取：
1、细菌或培育细胞样品：先搜集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；依照细菌或细胞数量（10⁴个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的份额（主张1000万细菌或细胞参加2mL试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，距离10s，重复30次）；8000g 常温离心10min，取上清，置冰上待测。
2、安排样品：依照安排质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的份额（主张称取约0.2g安排，参加2mL试剂一），进行冰浴匀浆。8000g 常温离心10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）或细胞培育液样品：依照血清（浆）或细胞培育液体积（mL）：试剂一体积(mL)为1：5~10的份额（主张取0.2mL血清（浆）或许细胞培育液参加2mL试剂一），进行冰浴匀浆。8000g 常温离心10min，取上清，置冰上待测。
谷氨酰胺(Gln)含量测定试剂盒分光光度法
测定过程

• 分光光度计预热30min以上，调理波长至570nm，蒸馏水调零。

• 在有盖EP管中参加下列试剂：

混匀，37℃水浴30min（盖紧，以防止水分流失），

90℃水浴20min（盖紧，以防止水分流失），流水冷却，于570nm波利益比色，
△A=A测定管-A对看管1 - A对看管2。对看管2只要做一管。
谷氨酰胺含量核算：
1、规范条件下测定回归方程为y = 0.0074x-0.5255；x为谷氨酰胺含量（µg/mL），y为吸光值。
2、依照血清（浆）或许细胞培育液体积核算
谷氨酰胺含量(μg/mL)=[(△A+0.5255)÷0.0074×V1]÷(V3×V1÷V2）=1351×(△A+0.5255)
3、依照蛋白浓度核算
谷氨酰胺含量(µg/mg prot)=[(△A+0.5255)÷0.0074×V1]÷(V1×Cpr)=135.1×(△A+0.5255) ÷Cpr
4、依照样本质量核算
谷氨酰胺含量(µg/g鲜重)=[(△A+0.5255)÷0.0074×V1]÷(W×V1÷V2)=270.2×(△A+0.5255) ÷W
5、依照细菌或细胞密度核算
谷氨酰胺含量(μg/10⁴cell)=[(△A+0.5255)÷0.0074×V1]÷(1000×V1÷V2)=0.27×(△A+0.5255)
V1：参加反响系统中样本体积，1mL；V2：参加提取液体积，2mL；V3：参加血清（浆）或细胞培育液体积，0.2mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；1000：细菌或细胞总数，1000万。
谷氨酰胺(Gln)含量测定试剂盒分光光度法
留意：
1、该试剂盒仅适用于发酵液或安排中谷氨酰胺含量测定，检测下限为100µg/mL。
2、规范曲线线性规模为：100µg/mL-600µg/mL。
3、ΔA线性规模为：0.01-2；若大于2则需要将上清液用试剂一稀释至恰当倍数后测定，核算公式中乘以相应稀释倍数。
谷氨酰胺(Gln)含量测定试剂盒分光光度法