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楼主
WB 是检测和定量磷酸化蛋白质的重要试验办法，但是我们一向都说磷酸化蛋白 WB 不好做！WB 磷酸化蛋白曝不出条带的时分，会特别懊丧。
远慕在此给我们列出几点小主张，希望能帮助您改进一下试验成果。
1、样本是否表达：
查阅材料或经过预试验确认。
2、对照设置：
阳性和阴性对照。
总蛋白抗体对照，关于特定时刻的特定样品，磷酸化和非磷酸化蛋白质的总和代表该特定蛋白质的总量。在相同的 WB 检测中， 磷酸化蛋白质的量添加一般伴随着非磷酸化蛋白质的下降。
3、内参设置：
依据试验挑选适宜的内参，如Actin、GAPDH 等
4、恰当的提取办法：
蛋白质提取的办法不只影响提取功率，还会影响蛋白的质量。主张选用裂解液裂解和超声破碎组合的方法，可保证整个样本充沛裂解。
5、低温操作：
室温条件下，磷酸化蛋白很简单被蛋白磷酸酶降解。请勿重复冻融，操作时必定置于冰上。
6、参加抑制剂：
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