前面几篇已对脂质体的文献查阅，处方辅料等做了很多的描绘，本篇对脂质体的制备工艺做专门的介绍。药物包封率、无菌性、药物保存性、制备办法和可否规模化出产，脂质体安稳性和本钱及有效性都取决于脂质体中载药办法的挑选。脂质体制备工艺的差异在于脂质从有机溶剂中枯燥或别离然后再涣散在水性介质中的办法。脂质体的首要制备工艺可分为自动载药法和被迫载药法两种。被迫载药法包含薄膜涣散法、逆向蒸腾法、二次乳化法、溶剂注入法、冷冻枯燥法、熔融法去污剂除掉法等。自动载药法包含PH值梯度法、硫酸铵梯度法、醋酸钙梯度法、离子载体法等。

1.*发布的攻略文章对脂质体工艺要求

1.1国外有2015年 FDA Liposome Drug Products脂质体药物制药工业攻略草案。

主张附上具体的工艺流程图和各操作点工艺监控参数改动规模及进程操控的描绘。这些改动规模应依据药学开发的研讨成果。

1.2国内涵 2020-11-30 公布了盐酸多柔比星脂质体注射液仿制药研讨技能指导准则（试行）。

选用硫酸铵梯度法制备的首要进程包含：1）空白脂质体的制备，2）硫酸铵梯度的构成，3）活性药物的装载。活性药物的装载是多柔比星在脂质体内外相的硫酸铵浓度梯度驱动下涣散到空白脂质体内完结的。应供给具体的出产工艺开发研讨材料和工艺验证材料（包含无菌工艺验证材料）。主张拟定合理的出产进程操控战略，如要害进程的出产时限、要害中间体的质量操控规范和坚持时限等。应特别重视出产工艺和批量对产品质量可控性的影响，注册批和商业批的出产工艺及批量准则上应坚持共同。

1.3我国药审中心：2005年10月20日细胞毒类抗肿瘤药脂质体制剂专题会会议纪要 。

现在报导的制备办法(如高压乳匀过滤法、注入法、旋转成膜水化法)均有工艺扩大的可行性，但在研讨的初期，就需重视工业化大出产需配套的仪器设备以及要害工艺环节的研讨。依据现在的研讨经历，关于旋转成膜水化后的产品，一般都不是很均匀，都需求通过匀质化处理（如超声，高压乳匀）。

1.4我国药审中心关于脂质体、乳剂注册申报注意事项文章：审评三部张宁注册分类五中的特别状况。

关于制剂而言，处方工艺挑选是整个研讨进程中的前期工作和要点工作，主张申办者能供详尽的处方工艺挑选进程,并附有详尽的实验数据和成果剖析。如上材料，从申报者的视点考虑，是对终究确认的处方工艺的合理性进行充沛的论述，从审评者的视点考虑，这是点评的根底。其间，需提示要点重视的是关于灭菌工艺的挑选和验证，如上制剂由于辅料的不安稳性（例如磷脂易氧化降解）、剂型的不安稳性（例如乳剂的分层问题）等，导致灭菌工艺的挑选比较困难，故提请申办单位对终究挑选的灭菌工艺进行验证，证明所用灭菌工艺既能确保产品到达无菌作用，又不影响产品质量。

1.5我国药审中心2004年11月11日两个肿瘤药物脂质体种类的专家咨询会。

处方工艺的挑选目标应全面，需归纳考虑包封率、渗漏率、粒径、安稳性（包含产品的安稳性和脂质材料的安稳性）等要素。关于要害的工艺条件和工艺进程应进行验证，阐明工艺的合理性和重现性。对所用的工艺设备应给予清晰阐明，并对扩大出产的可行性进行证明。

1.6 CFDA 发布《药物注射剂研制技能指导定见》征求定见稿2018年

灭菌/无菌出产工艺是注射剂的要害工艺进程，须依据灭菌决策树挑选合理的灭菌/无菌出产工艺，对灭菌/无菌工艺进行验证，并供给在拟定的工业出产规模出产线进行的工艺验证方案和陈述。重视特别类型注射剂出产进程中影响制剂特性的工艺要素，对出产工艺进行验证，并供给在拟定的商业化出产线进行的工艺验证方案和陈述。申报上市的注册批应该的确确保产品和工艺进程具有工业出产规模下的可行性，并供给验证材料。对特别类型注射剂，注册批出产规模一般至少是工业出产规模的五分之一或至少出产1000支/瓶，两者中选较大者。对工业出产规模少于1000支/瓶的特别种类，注册批出产规模应与工业出产规模共同。

2.被迫与自动载药工艺

药物参加脂质体有两种工艺。被迫载药，药物在制备进程中被包封在脂质体里。自动载药，药物装载到完好的脂质体中。

2.1被迫载药工艺

能否选用被迫载药工艺，取决于脂质体在构成期间包封特定体积水相的才能，一般在水相中含有溶解的药物。亲水药物，经被迫载药脂质体包封率与脂质体地点的水相体积有关，脂质体自身性质取决于涣散系统的磷脂浓度、层室数和脂质体形状。亲脂性药物与磷脂双层有相互作用，包封率取决于磷脂类别及其浓度。形状学参数不影响药物包封率。运用被迫载药技能，水溶性药物被包裹在脂质体的水相内，而脂溶性药物被包裹在脂质相中。药物脂溶性部分将嵌入脂质体磷脂之间，而它们的水溶性部分坐落脂质体水相中，然后被包封。

2.2自动载药工艺

自动载药是将现已制备的空白脂质体与药物浓溶液混合，孵育后，药物涣散均匀分布在脂质体中。磷脂层对药物涣散具有高度浸透性，能获得较高包封率。由于浓度梯度，药物可通过脂质双层浸透到脂质体中，直到周围介质和脂质体内部之间到达平衡。自动载药，水溶性药物无法进入脂质体内部。能够进入脂质体的疏水性药物的量，取决于脂质双层的空间约束程度。关于两亲性药物的状况，它们难以保存在脂质体内，由于它们能够快速浸透脂质双层。自动载药的缺陷在于它仅限一小部分表现为两性弱碱性或酸性的药物，只能在不带电的状况下浸透双层，而不能在带电的状况下浸透。

3.比较常用的制备工艺：

3.1溶剂注入法

溶剂注入法是比较常用的一种制备脂质体的办法，一般可将膜材涣散在乙醇或Y醚中，再将溶液注入药物的水溶液中，挥尽溶剂后再匀化或超声就可得到脂质体。所得脂质体囊泡的均匀直径与磷脂的性质、脂质与药物的份额，以及水相和有机溶剂组成有关。此办法比较于其他办法能够避免运用氯仿等有毒溶剂，而且以安全价廉的乙醇作为溶剂也更有利于大规模推行。可是该法现在也还存在溶剂残留难去除的问题。有人以为醚注入法优于乙醇注入法。

3.1.1乙醇注入法

含脂质的乙醇溶液快速注入过量的水相中。注入力须足以使溶液彻底混合。乙醇在水相中被稀释，使得脂质在水相中均匀涣散。能制备小单层脂质体囊泡。此外，该办法简单易行，适用于灵敏脂质，由于它能够避免其降解。缺陷是磷脂在乙醇中溶解度有限一同脂质膜中乙醇不易彻底除掉。

3.1.2醚注入法

将与脂质混溶的Y醚缓慢注入水相中，在必定温度下Y醚缓慢蒸腾，导致醚与水的梯度延伸到界面脂质单层膜的两边，构成的双层膜，折叠构成关闭的囊泡。此法能发生大的脂质体囊泡。醚注入法可避免了灵敏的磷脂被氧化降解。缺陷是单批脂质体所需的时刻较长及需求当心操控脂质溶液的参加。

3.2薄膜涣散法

薄膜涣散法是将药物溶于有机溶剂后，减压除掉溶剂，使脂质在容器壁上构成薄膜，再参加含有水溶性药物的缓冲溶液，充沛振摇后得到脂质体。可是此法要运用很多的有机溶剂，耗时长。该法涣散的磷脂会在水性缓冲液中发生形状和尺度较大（直径为1-5μm）的多层脂质体。因而，需求运用超声处理或通过聚碳酸酯滤器的技能，来下降脂质体尺度，发生尺度更小、更均匀的脂质体。它的缺陷是大多数水溶性化合物在溶胀进程中会被洗除，因而，只要10%-15%的水溶性物质可被包封。国内王溪淼用薄膜涣散法制备卡培他滨与奥沙利铂复方脂质体。邢宇等用薄膜涣散超声法制备银杏内酯B脂质体。

3.3逆向蒸腾法

将膜材的有机溶液与药物水溶液超声构成W/O型乳液，再减压蒸腾，就可得到脂质体。此法适用于水溶性药物和大分子活性物质。将磷脂与有机溶剂一同参加圆底烧瓶中。运用旋转蒸腾仪在减压和操控温度条件下，通过蒸腾除掉溶剂。用氮气吹扫，并将脂质从头溶解在有机相中。异丙醚和二Y醚是这种脂质体制备办法的溶剂。在从头溶解脂质后，获得乳液。在减压下从乳液中除掉有机溶剂后构成半固体凝胶。除掉游离的或未包封的药物，获得的脂质体称为逆相蒸腾脂质体。该法制备的脂质体药物的包封率较高。

3.4冷冻枯燥法

冷冻枯燥的办法可用于制备无菌和无热原的亚微米小尺度脂质体。将磷脂/胆固醇溶解于适合的有机溶剂中，常用的是叔丁醇，之后冷冻枯燥得到疏松的粉末，将之水化后，则能够得到脂质体。得到的脂质体仍为纳米级的不均匀的脂质体。如需求，能够采纳前述部分的办法，对其进行后处理。此种办法能够产业化，而且运用的叔丁醇毒性和乙醇类似，无安全问题。冻干制剂临床运用前进行超声处理。例如张晓云等人选用有机溶剂冻干法制得鬼臼毒素冻干脂质体，包封率到达93.72%。罗霄等人选用有机溶剂冻干法制备灯盏花素脂质体，制备3批脂质体，包封率均匀为87.5%。

3.5超临界流体法

将紧缩二氧化碳气体、有机助溶剂和脂质放入温度高于脂质改动温度的拌和反应釜中，然后慢慢注入水相。当开释紧缩气体下降压力时，构成脂质体。改进的超临界流体逆相蒸腾技能可提高了载药功率和脂质体的安稳性。

已有报导选用亚临界或临界或超临界的二氧化碳作为溶剂出产脂质体的办法和专用设备。将脂质体的质料混合，如磷脂、胆固醇、脂溶性活性成份等混合后参加到可关闭的罐中，再向罐中参加CO2，并使罐中温度和压力到达亚临界或临界或超越CO2的临界温度和压力，溶解脂质体的质料后开释罐中的CO2，使罐中压力下降至略高于常压。向罐中参加涣散液，浸泡或拌和构成包裹有脂溶性活性成份的脂质体。

3.6 pH值梯度法

首要依据药物的性质挑选内向缓冲液和外向缓冲液。假如药物为生物碱，则内向缓冲液则应为酸性缓冲液，外相缓冲液的pH值应挨近生理pH值。一般运用的酸性缓冲液应为多元有机酸，如枸橼酸、酒石酸等；要求药物能够和有机酸根复合构成胶态堆积。而外相缓冲液则应能够很好的溶解待包封药物，而且其pH能够确保绝大多数药物以非离解的方式存在，以便在加热孵育的进程中能够有效地穿透磷脂双分子层。挑选适宜的内外相缓冲液的组合是非常重要的，由于它直接决议了药物在贮存期内的安稳性和药物在体内的开释行为。确认内外相缓冲液后，就能够制备空白脂质体

挑选适宜的内外相缓冲液的组合是重要的，由于它直接决议了药物在贮存期内的安稳性和药物在体内的开释行为。

硫酸铵梯度是pH梯度常用的一种。以硫酸铵缓冲液为介质制备空白脂质体，通过透析后，在内外水相发生硫酸铵梯度，当脂质体双分子膜内的硫酸铵浓度远远大于外水相中的硫酸铵浓度时，内水相中的铵离子解离，然后使内水相pH下降，树立pH梯度。弱碱性药物以分子状况进入内水相，并在酸性条件下成盐，无法穿过磷脂双分子层回来外水相。药物成盐消耗掉内水相中的氢离子，然后使内水相pH添加，持续发生游离的氨分子。氨分子跨膜外逸构成pH梯度。上述进程不断进行直至内水相中氨离子消失，到达电化学平衡状况。与一般的pH梯度法比较，硫酸铵梯度法脂质体不易因外界pH的改动而走漏，被包裹入脂质体内水相的药物一般为弱碱性，可与硫酸根构成具有更低溶解性的盐，在脂质体内部集合，使其比一般pH梯度法愈加安稳，包封率更高。药物包封首要取决于内水相与外水相中硫酸铵浓度的比值。王绍宁等人别离选用薄膜涣散法、逆相蒸腾法、乙醇注入法和硫酸铵梯度法制备盐酸环丙沙星脂质体，成果表明硫酸铵梯度法制备脂质体的包封率（＞90 %），显着高于前3种办法制备得脂质体（＜40 %）。国外多柔比星脂质体注射液(Doxil, 1995)选用硫酸铵梯度法制备工艺。

蔗糖八硫酸盐梯度载药法近期也有一些报导。2015年上市的伊立替康脂质体Onivyde®，即选用蔗糖八硫酸盐梯度载药，使得伊立替康在弱酸性内水相中以堆积方式被安稳包载。Onivyde®所用磷脂辅料DSPC、胆固醇、DSPE-mPEG2000以及蔗糖八硫酸酯盐，我国艾伟拓公司均完结/方案完结CDE和DMF挂号。

此外制备脂质体的工艺还有复乳法、熔融法、表面活性剂处理法、离心法、前体脂质体法、钙融合法、加压挤出法、微射流法、膜接触器法、微流控，高压均质法等。

4.近期国内脂质体研讨制备工艺

现在国内报导的脂质体制备工艺已薄膜涣散法为多，还有逆向蒸腾法，载体堆积法和冷冻枯燥法等。

例如，嵇晶等用逆向蒸腾法制备丹参总酚酸复合磷脂脂质体。张璐等用薄膜涣散法制备紫杉醇五味子乙素脂质体。吕佳佳等用薄膜涣散超声法制备紫杉醇/姜黄素双载药脂质体。周婷等用薄膜涣散法制备羟基喜树碱脂质体。张丽用薄膜涣散法并冷冻枯燥制备卡巴他赛脂质体。沈贝莉莎用薄膜水化法并冻干制备紫杉醇脂质体。方晓旭等用冷冻枯燥法制备硬脂醇半乳糖苷润饰的阿西替尼脂质体。隋琳等以载体为甘露醇，用载体堆积法制备两性霉素前体脂质体。

通过几十年的开展，脂质体制备工艺的研讨现已获得很大的前进，切向流过滤法，薄膜涣散法、逆相蒸腾法、注入法、超声波涣散法、pH梯度法、硫酸铵梯度法、醋酸钙梯度法及其他离子梯度法的相继问世拓宽了脂质体工艺新思路。脂质体归于彻底靠工艺操控药品质量的产品；要害工艺进程：如乳化工艺、溶剂去除工艺、载药工艺、过滤工艺等要害进程最好悉数自动化操作，根绝人为要素引起的工艺误差。信任跟着制备工艺设备和条件的日益老练，脂质体制备工艺水平将会有更宽广的开展空间。