细胞介绍

　　母细胞3D4来历于pSV3neo质粒转染猪原代肺泡巨噬细胞得到的。该克隆经过G418挑选得到。

　　细胞特性

　　细胞称号：猪肺泡巨噬细胞

　　智立编码：20211259101515396

　　细胞信息：3D4/21/(种属判定正确)

　　来历：猪肺

　　形状：巨噬细胞样，贴壁成长

　　含量：>1x106个

　　标准：T25瓶或许1mL冻存管包装

　　用处：仅供科研运用。

　　运送和保存

　　干冰运送及复苏好存活细胞

　　（1）1mL冻存管包装干冰运送，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已蒸发洁净、冻存管瓶盖掉落、破损及细胞有污染，请当即与咱们联络。

　　（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后依照细胞接纳后的处理办法操作。

　　细胞接纳后的处理：

　　1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培育箱放置约2-3h，若发现培育瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请摄影后及时联络咱们。

　　2）请在4或5X显微镜下承认细胞状况，一起给刚收到的细胞摄影（10×，20×）各2-3张以及培育瓶外观相片一张留存，作为售后时收届时细胞状况的依据。

　　3）贴壁细胞：细胞在37℃培育箱中放置2-3h，显微镜下调查细胞的成长和贴壁状况，有些贴壁细胞在快递运送进程中会因振荡掉落和掉落后成团的状况。若镜下调查细胞的成长密度若在60%以下，可去除培育瓶中灌液培育基（若有未贴壁的细胞需求离心收回，重悬打入到原培育瓶中）,参加新制造的彻底培育基6-8mL，放到细胞培育箱中持续培育。若细胞成长密度达70%-80%以上，能够对细胞进行传代处理。传代进程中，若因运送振荡掉落的细胞需求离心收回。

　　4）补白：运送用的培育基（灌液培育基）不能再用来培育细胞，请换用依照说明书细胞培育条件新制造的彻底培育基来培育细胞。收到细胞后传代主张T25培育瓶1：2传代。

　　一．培育基及培育冻存条件预备

　　1）预备RPMI-1640培育基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

　　2).培育条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37℃，培育箱湿度为70%-80%。

　　3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

　　二．细胞处理：

　　1）冻存细胞的复苏：

　　将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中敏捷摇晃冻结，参加到含4-6mL彻底培育基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，彻底培育基重悬细胞。然后将细胞悬液参加含6-8ml彻底培育基的培育瓶（或皿）中37℃培育过夜。第二天显微镜下调查细胞成长状况和细胞密度。

　　2）细胞传代：假如细胞密度达80%-90%，即可进行传代培育。

　　关于贴壁细胞传代能够参阅以下办法：

　　1.弃去培育上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

　　2.参加0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53mMEDTA于培育瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培育箱中消化1-2分钟（难消化的细胞能够恰当延伸消化时刻），然后在显微镜下调查细胞消化状况，若细胞大部分变圆并掉落，敏捷拿回操作台，轻敲几下培育瓶后参加3-4ml含10%FBS的培育基来停止消化。

　　3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培育液后吹匀。将细胞悬液按1：2的份额分到新T25瓶中，增加6-8ml依照说明书要求装备的新的彻底培育基以坚持细胞的成长生机，后续传代依据实际状况按1:2~1:5的份额进行。

　　3）细胞冻存:收到细胞后主张在培育前3代时冻存一批细胞种子以备后续试验运用。

　　下面T25瓶为例；

　　1.细胞冻存时依照细胞传代的进程搜集消化好的细胞到离心管中，可运用血球计数板计数，来决议细胞的冻存密度。一般细胞的引荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.

　　2.1000rpm离心3-5min，去掉上清。用制造好的细胞冻存液重悬细胞，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标示好称号、代数、日期等信息。

　　3.即将冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中贮存。一起记载好冻存管在液氮容器中的方位以便后续查阅和运用。

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