关于许多生物研讨者来说，培育细胞最最重要的一点是，在培育的进程中必定要留意细胞的污染，一般来说，细胞污染不可防止，但能够削减其产生的频率和结果的严峻性，所以在培育细胞的进程中必定要留意细胞培育的环境。那构成细胞污染都存在哪些方面的要素以及应该留意哪些操作事项呢？

　　细胞污染依据污染源首要能够分为化学性，物理性和生物性污染。

　　化学性污染

　　培育环境中许多化学物质都能够引起细胞的污染。化学物质并不总是按捺细胞的成长，某些化学物质如激素就可促进细胞的成长。不同细胞对化学物质污染的反应是不一样的。未纯化的物质、试剂、水、血清、成长辅助因子及贮存试剂的容器都或许成为化学性污染的来历。

　　细胞培育的必需营养，如氨基酸，若浓度超过了适宜的规模，也会对细胞产生毒性。相同，不同细胞系其培育条件下对血清和缓冲液的要求是不一样的，在培育中应严格控制。

　　玻璃制品清洗进程中残留的变性剂或番笕(一般残留在瓶盖的内外表)是化学性污染。为了防止金属离子、有机分子、细胞内毒素等物质对水的污染，在制造液体，清洗容器时有必要运用不含杂质的超纯水。

　　动物血清是细胞培育中常用的天然培育基，但血清又是潜在的生物及化学污染的来历。因为血清收集于多个动物，并且不同厂商的出产工艺及质量各不相同，因而血清中许多成分的浓度存在很大的变异。血清对不同细胞的促成长才能及毒副作用取决于这些细胞的分解功用、安排来历及培育基的成分等要素。在进行一系列试验时，为了确保试验的可重复性，选用同一批次的血清。

　　细胞培育运用的一切物质都应是高纯度的，并经过安排的判定，试验者应对上述成分进行纯度判定。一起，正确装备和贮存培育液及试剂也是非常重要的，应该采纳规范的操作进程，防止液体体积计算过错，混用相似化合物等过错。

　　物理性污染

　　物理性污染常常被人们所忽视或被抽象地归为化学性污染。物理性污染经过影响细胞培育体系中的生化成分，然后影响细胞的代谢。培育环境中的物理要素，如温度、放射线、振荡、辐射(紫外线或荧光)会对细胞产生影响。

　　细胞、培育液或其它培育试剂露出于放射线、辐射或过冷过热的温度中，能够引起细胞代谢产生改动，如细胞同步化、细胞成长受按捺乃至细胞逝世。经过试验室的合理规划及树立规范的操作规程，能够削减环境中物理要素对细胞的影响。孵箱应放在温度较稳定的环境中，周围不能放置能引起机械振荡的设备，如离心机。

　　培育液及培育试剂应放在固定的方位，为防止光照试剂不能放在玻璃门的冰箱中，试剂周围不能放同位素。培育液从冰箱中取出后应在室温中放置一段时刻后再进行试验，以防止过冷的温度对细胞的影响。

　　微生物污染

　　因为体外培育的细胞本身没有反抗污染的才能，而在培育基中加抗生素的抗污染才能也是有限的，因而细胞微生物污染一旦产生往往是无法抢救的。一般在细胞遭到污染前期或污染较轻时，能及时处理并除掉污染物，部分细胞还有或许得到抢救。

　　不同的微生物污染物对细胞的影响也有不同，微生物中支原体和病毒对细胞形状和技术的影响是长时刻的，缓慢的和潜在的。而霉菌和细菌增殖敏捷，能在很短的时刻内按捺细胞成长或产生有毒物质杀灭细胞。

　　霉菌污染

　　品种许多，污染的多是曲霉菌，白色念珠菌，酵母菌，黑霉菌，孢子菌等。霉菌污染后大都在培育液中构成淡黄色或是白色的漂浮物，一般肉眼可见，较易被发现，短期内培育液多不变混浊。

　　倒置显微镜下能够看见细胞之间有犬牙交错穿行的丝状，树枝状或管状菌丝，并漂浮在培育液中。许多菌丝在高倍镜下能够看见链状摆放的菌株。念珠菌及酵母菌菌株呈卵圆形，散在细胞上及细胞周边成长。

　　处理：确认是霉菌污染，假如细胞品种不是特别宝贵，直接抛弃，并将试验环节彻底消毒。

　　细菌污染

　　细菌污染较常见的有大肠杆菌，白色葡萄球菌，假单孢菌等。加用抗菌素的培育液可防备和扫除单个一般少数细菌的污染。一旦产生细菌污染很简单发现，大都情况下培育液短时刻内变黄，标明有很多酸性物质产生，呈现显着污浊现象；有时静置的培育液起先不混，但稍加震动，就有许多混浊物漂起。

　　倒置显微镜下调查，可见培育液中有很多圆球状颗粒物漂浮，有时在细胞外表及周围有很多细菌存在，细胞中止成长并有中毒体现。必要时可取少数培育液涂片染色查看以清晰细菌品种；有的培育液改动不显着而有疑似污染，亦可向肉汤培育基内地入少数培育液，37℃培育以检测。

　　处理：一般用抗生素的常用量的5~10倍作冲击疗法，用药24~48小时后再换惯例培育液，有时在前期污染时此法有用。细胞培育顶用抗生素多为防备细菌污染，一半多联合运用。

　　支原体污染

　　支原体是一种巨细介于细菌和病毒之间(最小直径0.2um)并独立日子的微生物．约有1%可经过滤菌器。支原体无细胞壁形状呈高度多形性．可为圆形、丝状或梨形。

　　支原体形状多变，在光境下不易看清内部结构。大都支原体适合于偏碱条件下生计(PH7.6-8.0)，对酸耐受性差。对热比较灵敏，对一般抗生素不灵敏。

　　支原体污染细胞后．培育液可不产生混浊．大都情况下细胞病理改变纤细或不明显，纤细改变也可因为传代、换液而缓解．因而易被忽视。但单个严峻者，可致细胞增殖缓慢．乃至从培育器皿掉落。

　　为确认有无支原体污染可做如下检测：

　　a:相差显微境检测；

　　b:荧光染色法；

　　c:电镜查看；

　　d:DNA分子条文查看或支原体培育等办法。

　　处理：商场上有多种支原体铲除试剂盒，作用比较好。

　　酵母污染

　　酵母处处存在，并能在适宜的环境中快速成长。酵母污染很简单调查到，培育物变污浊，尤其在后期。一般PH值改变很小，严峻时，PH值升高。显微镜下呈卵圆形或球形颗粒，有些会芽生较小颗粒。

　　病毒污染

　　安排细胞培育进程中，假如没有除掉潜在的病毒，就会产生病毒污染。现在，从原代猴肾细胞的培育中已发现不少于20种血清性病毒。

　　虽然病毒污染的细胞不影响原代培育，但出产疫苗是不安全的。因而，潜在病毒是细胞很多出产和疫苗、干扰素等生物制品制造中的难题。

　　细胞穿插污染

　　细胞污染和细菌污染不同，细胞污染是因为在培育进程中各种细胞一起进行，而所用用具或液体稠浊运用所造成的。这种污染没有微生物存在，但使培育细胞不同品种之间产生紊乱，细胞成长特性，形状产生改变。有些改变纤细，不易发觉，有些则或许因为污染的细胞具有成长优势而终究压过本来细胞而导致细胞成长的按捺，终究逝世。污染过的细胞因为品种不纯，无法进行试验研讨。

　　防备污染办法需求考虑的留意事项

　　进入培育间时，坚持双手洁净。运用番笕彻底清洗后，酒精枯燥（不必纸巾）

　　佩带手套（确保手套能够被消毒）

　　穿戴带有松紧袖口的试验服

　　不要随意触碰无关物品（例如：电话、门把手、乃至说是收拾头发等）

　　防止佩带手表、戒指和其他首饰

　　脱去在其他当地触摸过动物的衣服

　　患有伤风的人员需佩带面罩

　　杰出规范的操作

　　为您的CO2培育箱树立一套日常的规范清洗程序（清洁区域需求包含培育箱周围的区域，特别是培育箱的顶部）

　　常常查看试验室的其他设备是否遭到污染（例如：洗手池/离心机等）

　　有方案放置您的培育箱，尽量削减开门时刻和不必要的移动

　　快速开关CO2培育箱

　　约束运用同一培育箱的人数

　　赶快铲除溢出物，之后用酒精清洁

　　放弃水纯化体系开始得到的水

　　重视培育进程

　　细胞培育需求常常性地查看是否被污染

　　运用半个敞开培育皿盛放安排培育基。开口放置于培育箱中1至4个小时。盖上培育皿盖子。37℃培育24-72小时。调查现象。

　　前期发现污染能够进步培育物存活的几率

　　不要混用、同享培育皿或培育基

　　不要令盛放培育基的容器开口放置过长时刻

　　彻底被污染的培育涉及物需求用高压灭菌消毒

　　尽量运用一次性预灭菌培育耗材