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版块:机械制造   类型:普通   作者:化工产业技术分享   查看:58   回复:0   获赞:0   时间:2022-05-18 18:37:00

细胞转染是指将外源分子如 DNA RNA 等导入真核细胞的技能。可分为瞬时转染,安稳转染等。瞬时转染是指外源 DNA/RNA 不整合到宿主染色体中,因而一个宿主细胞可存在多个拷贝数,发生高水平的表达,但一般只继续几天,多用于发动子和其他调控元件的剖析。一般来说,超螺旋质粒 DNA 转染功率较高,在转染后 24-72 h 内剖析成果,常常用到一些陈述体系如荧光蛋白,β半乳糖苷酶等来协助检测。安稳转染是指外源 DNA 既可以整合到宿主染色体中,也或许作为一种游离体存在。虽然线性 DNA 比超螺旋 DNA 转入量低但整合率高。外源 DNA 整合到染色体中概率很小,一般需求一些选择性符号重复挑选得到安稳转染的同源细胞系。

主要有下面几种办法:
化学法:磷酸钙法、DEAE-右旋糖苷法、阳离子脂质体法;物理法:电穿孔法、显微注射法、biolistic 颗粒传递法;病毒介导法:逆转录病毒、腺病毒

A. 阳离子脂质体法:
带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团构成复合物被细胞内吞。进程如下:
特色:
简略通用,适用性广,转染功率高,重复性好,但转染时需除血清,转染功率随细胞类型改变大。因为脂质体复合物与贴壁细胞的触摸时机远大于悬浮细胞,所以贴壁比悬浮转染功率要高。悬浮细胞主张运用电穿孔法。

B. 电穿孔法:
使用高压电脉冲对细胞膜的搅扰,使其构成利于核酸进入的微孔。

C. 逆转录病毒(RNA):
经过病毒中膜糖蛋白和宿主细胞外表的受体相互作用进入宿主细胞,之后反转录酶发动组成 DNA 并随机整合到宿主基因组中。
特色:安稳转染,可用于难转染的细胞、原代细胞,体内细胞等,但带着基因不能太大。

D. 腺病毒(双链 DNA):
先和细胞外表的受体结合,继而在αV 整合素介导下被细胞内吞。
特色:可用于难转染的细胞。

影响转染的要素:
血清 血清影响复合物的构成,下降转染功率


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