细胞培育的过程及注意事项

　　一、 复苏

　　1. 把冻存管从液氮中取出来，当即投入37℃水浴锅中，细微摇摆。液体都消融后(大约1-1.5分钟)，拿出来喷点酒精放到超净工作台里。

　　2. 把上述细胞悬液吸到装10ml培育基的15ml的离心管中(用培育基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来)，1000转离心5分钟。

　　3. 把上清液倒掉，加1ml培育基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培育基的10cm培育皿中前后左右悄悄摇摆，使培育皿中的细胞均匀分布。

　　4. 标好细胞品种和日期、培育人姓名等，放到CO2培育箱中培育，细胞贴壁后换培育基。

　　5. 3天换一次培育基。

　　二、 传代

　　1. 培育皿中的细胞掩盖率到达80%-90%时要传代。

　　2. 把原有培育基吸掉。

　　3. 加恰当的胰蛋白酶(能掩盖细胞就行)，消化1-2分钟。

　　4. 细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培育基停止消化。

　　5. 用移液枪吹打细胞，把细胞都悬浮起来。

　　6. 把细胞吸到15ml的离心管中，1000转离心5分钟。

　　7. 倒掉上清液，加1-2ml培育基，把细胞都吹起来。

　　8. 依据细胞品种把细胞传到几个培育皿中。一般，癌细胞分5个，正常细胞传3个。持续培育。

　　三、 冻存把细胞消化下来并离心(同上)。用配好的冻存液把细胞悬浮起来，分装到灭菌的冻存管中，停止几分钟，写明细胞品种，冻存日期。4℃ 30min，-20℃ 30min，-80℃过夜，然后放到液氮灌中保存。 冻存液的制造： 70%的彻底培育基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要渐渐滴加，边滴边摇。

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