什么是荧光定量PCR？

指在PCR反响系统中参加荧光基团，运用荧光信号堆集实时监测整个
PCR进程，使每一个循环变得“可见”，最终经过Ct值和规范曲线对样品中的DNA(or cDNA)的开始浓度进行定量的办法。

定量PCR原理？

与传统PCR相同,反响在温度模块里循环进行；理论上每经过一个循环意图基因的数量都会添加一倍；每个循环完毕后,定量PCR仪器经过不同的滤光片记载荧光信号；在扩增过程中,荧光信号跟着PCR产品的添加而增强。

定量PCR系统？

一般的PCR系统；模板,引物,dNTPs，buffer，Taq酶；参加各种类型的荧光染料。

在做Real time PCR时，关于SYBR Green I染料法和Taqman探针法都能够，可是二者有差异。SYBR Green I染料法是运用SYBR Green I结合双链DNA来检测PCR产品，可用于监测恣意双链DNA序列的扩增，可是有必要考虑非特异性扩增。因本钱相对低，是现在较常用的)。可是因为SYBRGreen I能够与一切的双链DNA结合，包含非特异性的双链DNA序列，因而可能会产生假阳性信号。

图1：SYBR染料法原理图

Taqman探针法运用荧光探针检测PCR扩增过程中产生的特异PCR产品：特异性荧光信号的产生，需求探针与方针序列进行特异性的杂交；探针能够符号不同的陈述基团，因而能够在一个反响管中进行二条序列扩增完好的探针。5′端荧光基团吸收能量后将能量转移给接近的3′端荧光淬灭基团(产生荧光共振能量转移)；退火，探针与模板结合，引物在聚合酶效果下进行延伸反响，遇到探针时发挥3′-5′外切酶活性将探针切碎到反响系统中；陈述基团与淬灭基团间隔变大，在激发光的效果下发荧光。试验成果重复性好，价格高。

图2：TaqMan探针法原理图

说了这么多，不知道小伙伴们对qPCR的了解是不是明晰多了呢?qPCR作为一种简略快捷的定量技能，应该是小伙伴们常用的技能了。尽管听起来简略但做起来却没有幻想的那么简略，事实上，试验室做一个样本检测QPCR需求1~2个小时，这个时分不只试剂盒重要，检测才能也很重要，期望这篇文章能协助小伙伴们对QPCR有一个明晰的了解