人类Vav2蛋白的DH结构域已在细菌表达体系中发生。它含有一个6xHis符号在其氨基结尾用于纯化。注册号为NM001134398.1。GE06的分子量约为25kDa。Vav2 DH蛋白以白色冻干粉末的方式供给。蛋白质纯度经过在4-20%聚丙烯酰胺梯度凝胶上扫描考马斯蓝染色蛋白质的密度测定来确认。Vav2 DH蛋白的纯度约为80%。

Cytoskeleton/艾美捷Vav2蛋白是一种对Rac1有选择性的鸟嘌呤交流因子，在多种条件下介导Rac1激活，并与胃肿瘤以及细胞体积操控和神经轴突延伸有关：

1.Vav2 GTP/GDP交流活性抑制剂的研讨

2.Vav2 DH结构域结合蛋白的判定

3.不同GTP酶对Vav2-GEF活性的研讨

Cytoskeleton掩盖肌动蛋白，微管蛋白，马达蛋白，小G蛋白，细胞外基质，活细胞成像等相关范畴，供给对应的蛋白质，抗体，检测与剖析试剂盒。

Cytoskeleton/艾美捷Vav2蛋白生物活性测定：

Vav2 DH的生物活性能够经过其催化Rac1上核苷酸交流的才能来确认，运用Bodipy GDP的核苷酸交流试验检测过量的GDP或GTP。Rac1蛋白质经过增加过量的EDTA预加载Bodipy FL GDP，例如，反响中每mmol Mg2+离子增加0.7 mmol EDTA。然后以解离剖析的方式运用该子储藏溶液，这表明与未符号的核苷酸竞赛交流位点。反响经过485nm Ex/535nm Em下的荧光丈量进行监测。严厉的质量操控保证在存在0.8µM Vav2 DH的情况下，Bodipy GTP或mant GTP的交流率至少进步五倍。

办法：

1.将Vav2小瓶放在冰上，用严寒交流缓冲液稀释至0.30微克/微升（8微升）。

2.用严寒交流缓冲液将Rac蛋白稀释至1.25µg/µl（50µM）。

3.在新鲜的15毫升Falcon管中参加以下成分，并经过移液管或悄悄旋涡充沛混合：

每口井的成分微升交流缓冲区75

50µM Rac 5

8µM Vav2 10

注：关于总混合物体积，将每个孔的试剂体积乘以试验中的孔数，再加上20%的体积以核算移液丢失。

4.在室温（RT）下培育20分钟。

5.经过增加10µl（每孔）50 mM MgCl2确定核苷酸。

6.设置荧光计，激起波长为485 nm+/-15 nm，发射波长为525 nm+/-15 nm。

7.将预加载的混合物等分到指丨定的孔中，并将平板放入荧光计中。

8.在5个周期（150秒）后，将程序置于坚持或暂停状况，然后卸下平板。

9.移取10µl a）5 mM GTP溶液，b）小化合物，c）测验蛋白质，d）4 mM EDTA（+ve交流对照）或e）稀释缓冲液（阴性对照）于各孔中，并当即上下移液两次，然后持续读取20分钟。

10.完结动力学计划后保存读数。经过将数据削减到最大斜率（运用12个点）或Vmax，并运用读板器顺便的软件，能够核算汇率。交流曲线能够经过导出到Microsoft Excel来完成。

艾美捷科技是Cytoskeleton的我国代理商，为科研工作者供给优质的产品与服务。