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胎牛血清一般在细胞培育中作为基础成长培育基的添加剂,在细胞培育中,血清供给了丰厚的高分子蛋白,低分子量养分物,疏水载体蛋白和其他体外细胞成长必要的成分如激素和粘附因子。一起,胎牛血清能够添加培育基的缓冲才干或中和有毒成分,起到维护细胞的效果。在细胞培育过程中是否挑选添加血清,首要依据基础培育基化学成分,培育细胞的类型和培育体系而定。
血清试验中常见的问题解析:
一、 怎样贮存和冻结血清才不会使产品质量受损?
将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但有必要留意的是,融解过程中有必要规矩地摇晃均匀。
长时间贮存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)或许集合而构成沉积或可见的混浊。因而,引荐在-20℃以下贮存血清,并防止重复冻融。
主张血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时,请勿超越一个月。若一次无法用完一瓶,主张无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。
二、血清中包含絮状沉积,它们是什么,怎样处理?
沉积包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性,不会影响产品性质。要除掉沉积,离心血清(400g,1-2分钟)或许简略的让其沉积在瓶子底部,将血清当心的转移到另一个无菌瓶里(一般不主张选用过滤的办法除掉沉积,由于沉积会阻塞滤膜而无法过滤)。大多状况悄悄摇摆沉积并加热至37℃就会再溶解。所以,运用产品时要摇摆并加热血清至37℃,沉积会天然消失。
三、 培育基中添加了血清和抗生素后,可长时间保存吗?
一旦您在新鲜培育基中添加了血清和抗生素时,您应该在两到三周内运用它。由于一些抗生素和血清中的基本成分在冻结后就开端降解。
四、 为什么要热灭活血清?
加热能够灭活补体系统。激活的补体参加溶解细胞事情,影响滑润肌缩短,细胞和血小板开释组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学 研讨,培育ES细胞、滑润肌细胞时,引荐运用热灭活血清。
五、 有必要做热灭活吗?
试验显现,经过正确处理的热灭活血清,对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的成长只要细小的促进,或彻底没有任何效果,乃至一般由于高温处理影响了血清的质量,而构成细胞成长速率的下降。
而经过热处理的血清,沉积物的构成会明显的增多,这些沉积物在倒置显微镜下调查,像是“小黑点”,常常会让研讨者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉积物更增多,使研讨者误认为是微生物 的割裂扩增。
非有必要,能够不需要做热处理这一步。不光节省时间,更保证血清的质量!
六、细胞培育 中呈现黑点是污染吗?怎样处理?
一旦您在细胞培育的过程中发现有黑点生成,首要,要肉眼调查培育基是否混浊,然后,在镜下调查培育细胞成长的状况,黑点是否游动。假如细胞被污染,微生物则会很多繁衍,培育基就会敏捷变黄、变混浊。污染包含细菌污染、支原体污染等。
七、小牛血清和胎牛血清有何差异与留意事项?
来历不同:胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰怀孕母牛的时分,经过心脏穿刺采血获取的胎牛的血清,重生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出世10至14 天的小牛。
组份与份额不同:两者所含的促细胞成长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组份与份额不同,用处与用法不同:某些细胞必需胎牛血清才干成长,而有些细胞只需小牛血清即可,运用浓度不同,一般在5%-10%,有特殊要求的浓度在20%。
血清保存和运用须留意:血清应保存在-5℃至-20℃,若存放在4℃不行超越一个月。
冻结血清时 ,应先将血清至于2-8℃冰箱,并常常摇匀使之溶解,然后至室温放置使之升温,绝对不行将冷冻的血清直接放入37℃水浴或许温箱中,如放在37℃冻结,色彩加深,粘稠度也会添加,血清在冻结和热灭活后,应按用量分装并于-20℃保存,防止重复冻融。
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