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细胞的活性判定在生物学和医学上具有很重要的含义。它是体外细胞培养技能中常用的一个检测目标。不同的细胞活性判定办法有各自不同详细的反响机理,但不管选用哪种办法,都使用了死细胞和活细胞在生理机能和性质上的差异。常用的办法有直接染色法,克隆构成实验,比色法等。
下面咱们就简略的了解一下常用的细胞活性检测办法的原理,特色,以及各自的优缺陷。
化学染色法
染色计数法是细胞培养中查看细胞死活zui常用的办法,直接使用死细胞和活细胞对染料的不同亲和力,查看细胞活性,能在光学显微镜下观察到染色成果.可分为两类:死细胞上色法和活细胞上色法.使死细胞上色的常用染料有台盼蓝,苯胺黑,伊红Y.能使活细胞上色的常用染料有结晶紫,亚甲基蓝,甲苯胺蓝等.其间zui常用的是台盼蓝染色法….细胞损害或逝世时,台盼蓝可穿透变性的细胞膜,与崩溃的DNA结合,使其上色,而活细胞能阻挠染料进入细胞内,故能够辨别死细胞与活细胞.经过细胞计数可得出细胞的存活率.
长处:便利有用,价格低廉,操作简略
缺陷:时刻不宜过长,不然部分活细胞也会上色,会搅扰计数.并且,细胞没有经过固定,形状不明晰.
荧光染色法
一些荧光染料对死细胞和活细胞也有不同的作用作用,使用荧光显微镜检测细胞活性.如碘化丙锭。(PI),被活细胞排挤但能穿透正在逝世或现已逝世细胞的细胞膜,因此活细胞不被染料染上色,只要死细胞或是凋亡细胞才干染上红.色.叶啶橙(AO)能透过质膜完好的细胞,嵌入细胞核DNA,使之宣布亮堂的绿色荧光.溴化乙锭(EB)仅能透过胞膜受损的细胞,嵌入核DNA,发橘红色荧光.也可使用AO—EB双染法判定细胞死活.
长处:这种检测办法比较传统的染料,具有灵敏度高,操作简洁,成果简单分辩等特色,并且使用双染法还能够分辩活细胞,凋亡前期细胞,凋亡晚期细胞,逝世细胞,在细胞凋亡的检测上有很广泛的使用。
缺陷:要求特别的仪器进行检测,如荧光显微镜,激光扫描共聚集显微镜或流式细胞仪.并且一般荧光染料具有毒性,操作作时需要带手套.
克隆构成实验是测定单个细胞增值才能的有用办法之一,其基本原理是单个细胞在体外继续割裂增殖6 次以上,其子孙所组成的细胞集体,称为克隆或集落.一般状况,每个克降可含50个以上的细胞,巨细在0.3~~I.0mm之间.经过计数克隆构成率,可对单个细胞的增值潜力做定量分析.常见的办法有平板克隆构成实验,软琼脂构成实验等.这种办法常见于抗肿瘤药物敏感性实验,肿瘤放射生物学实验等.
长处:在低剂量辐射下,克隆构成实验比 MTT和SRB法的敏感性更强.
缺陷:较为繁琐并耗l时,不适合一起监测大量样品,并且在手动计数过程中带有非常大的不确定性,特别是当构成的细胞克降巨细差异较大时,很难得到更有用,准确的数据.
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