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逆转录PCR(RT-PCR)在试验室中经常被用于检测和量化样本中的RNA表达。试验的第一步是经过逆转录(RT)将不安稳的RNA转化为互补的DNA(cDNA)。实际上，RT是许多用于研讨RNA的分子生物学技能的第一步，因为将不安稳的RNA转换为更安稳的DNA会使剖析更简单、更牢靠。关于RT-PCR,有一步法和两步法。
在一步法RT-PCR中，RT反响和PCR扩增是在同一管中进行。将RNA模板添加到试管中，加有两种酶(逆转录酶和DNA聚合酶)，以及完结反响的一切有必要组分。逆转录酶发生cDNA产品，然后逆转录酶和cDNA变性，DNA聚合酶扩增cDNA。在一步法中，RT反响由基因特异性引物发动。因而，只要感兴趣的区域被反向转录，然后进行扩增。
在两步法RT-qPCR中，RT反响与PCR扩增独自进行。首要，RNA添加到反响混合物中，混合物包含逆转录酶和oligo-dTs (结合mRNA的poly-A尾巴)或随机六聚体(或两者都有)，组成cDNA。下一步，从管子中取出少数cDNA，置于一个新管中，作为PCR的模板与基因特定的引物一同混合。因为RT反响选用随机发动或由oligo-dTs进行发动，总RNA或总mRNA在RT过程中被转录。
虽然这两种办法都能得到终究的成果，可是每种办法都有优缺陷。挑选哪种办法取决于各种因素。如下总结它们的优缺陷。
一步法RT-PCR
一步法原理
原理 :One step RT-PCR选用了一步反响法完结整个RT-PCR反响，即RNA-cDNA-qPCR反响操作在同一反响系统中进行，反响过程中不需添加额定的过程，就可完结整个RT-PCR反响，具有便利、简捷、灵敏度高、重复性好的特色，可适用于各种动物、植物、病毒RNA的qPCR检测。
长处 :
1.简洁操作
2.削减污染的可能性。（RT和qPCR反响之间无需开管）。
3.别的因为得到的悉数cDNA产品都一同经PCR扩增，使得一步法的灵敏度更高。
4.适用于定量PCR。
缺陷 :灵敏度要比两步法低。不适合PCR初期条件的探索，出了问题之后不能够很好的找到原因
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