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跟着本钱稳步下降,二代测序NGS变逐步增多,但假如常常运用,它仍然是一种本钱贵重的东西。其实在试验室中,掌控好以下几个环节也是能够节约 NGS 的全体本钱的。这儿供给一些关于下降二代测序-NGS本钱的办法可供参考。
1.样品质量操控
样本的质量直接关乎到二代测本钱,质量较差的样本,会直接添加测序过程和处理时刻。所以,下降本钱的简略办法之一就是从样品提取开端,经过布置于样品类型和方针核酸的样品纯化办法,来保证用于下流剖析的核酸纯度和产值。NGS文库制备过程中发生的酶促反应对所用样品的数量和质量较灵敏。因而,量化样本(经过qPCR、荧光定量或核酸电泳等办法量化样本是一个重要过程,尤其是关于具有挑战性的样本,例如固定安排、污染或低丰度样本。
2.挑选正确的文库制备办法
罗氏以为,为预期的下流测序运用挑选正确的文库制备办法也是下降二代测序NGS本钱的首要办法。例如,假如测序意图仅仅挑选变异基因,那么只需求挑选对方针基因组编码区域进行富集和测序,需求测序样本总量也较少,然后答应每个用于测序运转的活动槽内取得较多的样品,这样能够进步生成的数据质量由此节约全体本钱。经过重复试验发现这种战略比全基因组测序本钱低,由于全基因组测序需求对每个样本进行杂乱的测序。别的文库制备东西包也能够协助您下降本钱。挑选一种快速、牢靠的文库制备办法来制备相似样品类型将削减手动操作时刻以及重复失利样品的需求,假如采用了适宜的办法,就能够空出人员和试验室设备来履行其它杂乱的NGS。在这个过程中能够运用一些试剂盒以到无PCR版别无需文库扩增,这样能够节约较多时刻。
3.NGS样本QC,文库QC和文库池
样本QC,文库QC和文库池是额定的重要办法,假如施行妥当,也能够协助下降NGS本钱。可是,样本库的不正确聚集或许会发生每个样本的序列读取掩盖率可变(不平衡)的测序运转,需求在剖析过程中对读取进行生物信息下采样并糟蹋测序读取,因而,QC办法有助于保证您对质量较高的文库进行测序,然后下降NGS本钱。下降二代测序-NGS本钱的办法上面说到的运用qPCR、荧光法或电泳办法对NGS文库进行量化是聚集和测序之前的关键过程,在这一步精确操控文库的数量将对测序掩盖深度、样品均匀性和活动池聚类发生积极影响。
4.了解测序质量目标
经过了解测序质量和数据剖析的目标来优化您的NGS作业流程,这有助于进步数据质量。糟糕的测序质量目标将削减测序运转的全体可用数据,这意味着需求额定进行本钱贵重的测序,所以,了解数据剖析目标有助于研究人员确认试验试剂和作业流程,以生成较高质量的数据来回馈试验。
5.不要过度排序或排序缺乏
从每次测序读取中获取尽或许多的信息还能够经过防止对您的文库进行过度或缺乏测序来下降本钱。过度测序会导致显着的不必要的糟蹋。
6.运用多路复用和自动化
尽或许多路复用NGS样本是也是节约二代测序NGS的办法之一。这或许需求对索引计划进行一些和谐,运用自动化测序的试验室设备有助于消减人工本钱及人为过错,尽管购买和优化这样一个体系的前期本钱较高,但假如能够忍受费用,那么跟着时刻的推移,节约的时刻、添加的可重复性将抵消初始本钱。
7.定时评价作业流程、试验试剂和NGS技能
定时从头评价作业流程、试剂和技能也能够节约时刻和金钱。您的试验室的样品通量或许会跟着时刻的推移而添加,一些新式的文库定量试剂盒可以进步NGS文库制备功率。比方:tiangen系列的TIANSeq文库定量试剂盒,适用于illumina渠道的NR102-TIANSeq快速RNA文库构建试剂盒等。
姑苏阿尔法生物十三年专心于生物试验室设备及试验室耗材供给,PCR及NGS相关产品包含PCR仪器、快速PCR仪、荧光定量PCR、NGS试剂盒、质粒小提试剂盒、RNA提取试剂盒等。
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