翻开离心机，将离心机运转至低温4℃并坚持温度。保证一切试剂缓冲液、试验解剖东西、安排匀浆东西以及离心机转子等均维持在4℃（或许在满足的冰上操作）

1.1小鼠处死方法

用颈脱位法处死试验用的小鼠

1.2线粒体提取流程

a)试验解剖，取出小鼠心脏部位，去除剩下的血管结构、结缔安排以及脂肪安排等，将处理好的心脏器官马上放入BIOPS缓冲液中，整个进程在4℃环境（或冰上）进行

b)在4℃条件下，将心脏器官放入有盖培养皿中，依据试验需求，独自提取左心室或许运用整个心脏；操作者需当心去除血液凝块等安排。将处理好的心脏放入10ml的玻璃烧杯中，参加1ml 4℃ BIOPS缓冲液（见2.1），取低温剪刀，将试验心脏安排剪碎至小块

c)将安排碎块放入10ml手动玻璃研磨器中，参加2ml线粒体缓冲液B（见2.3），匀速手动研磨6-8次，构成心脏安排匀浆液

d)将心脏安排匀浆液放入50ml离心管中，再参加3ml线粒体缓冲液B

e)将上述液体在4℃、800g的条件下离心10min

f)取出上清液，从头放置于新的50ml离心管中

g)将该上清液再次在4℃、10000g条件下离心10min

h)移除上清液，保存线粒体沉积

i)用500微升线粒体缓冲液A（见2.2）再次悬浮线粒体沉积，然后，用线粒体缓冲液A将液体定容至2ml，构成线粒体悬浮液

j)将线粒体悬浮液在4℃、10000g的条件下离心10min，保存沉积

k)用悬浮缓冲液（见2.4）再次悬浮线粒体沉积，定容至200微升

l)取5微升线粒体悬浮液直接参加O2k能量代谢丈量仪的仓室中，用于线粒体呼吸才能的丈量

m)将剩下的线粒体悬浮液进行分装，每20微升放入一个离心管，零下20℃保存，用于后续的剖析（蛋白浓度定量等）

2.1BIOPS器官安排缓冲液

常见于安排器官等试验资料的缓冲液，具体内容可咨询工作人员

2.2线粒体缓冲液A