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楼主
HPV16-GFP假病毒说明书
【产品称号】
通用称号：HPV假病毒
【预期用处】
用于HPV抗血清或许单抗中和抗体滴度体外检测。
【查验原理】
中和抗体在体外与假病毒中和，使得假病毒损失感染细胞的才能，进入细胞的假病毒会表达EGFP等蛋白，经过Elispot读板仪扫描并计数每孔荧光斑点数，经过与假病毒对照组荧光斑点数比较，核算其按捺百分比，经过核算公式能够核算出当假病毒50%被按捺时抗体的稀释倍数，来核算其ID50,用ID50来表明抗体对假病毒中和活性巨细。
【首要组成成分】
HPV假病毒颗粒，L1和L2蛋白以及报告基因，自折叠成HPV假病毒颗粒
【储存条件及有效期】
-80℃密封储存。。
防止重复冻融。
生产日期及有效期详见标签。
【样本要求】HPV16-GFP假病毒说明书
样本为HPV假病毒，可在体内仿制一轮，操作时需在无菌条件下操作。
【查验办法】
1预先4-8小时铺293FT细胞于96孔板，每孔细胞数为1.5×104，置于37℃、5% CO2孵箱中培育。
2加样次序
2.1 40倍初始稀释：取96孔U型板，于B4- B11孔中各参加152μl DMEM培育基，其他各孔中参加120μl DMEM培育基。于B4- B11孔中参加血清样品8μl/孔，每样品两复孔。
2.2 10倍初始稀释：取96孔U型板，于B4- B11孔中各参加128μl DMEM培育基，其他各孔中参加120μl DMEM培育基。于B4- B11孔中参加血清样品32μl/孔，每样品两复孔。
加样次序表HPV16-GFP假病毒说明书
样品1 | 样品2 | 样品3 | 样品4 | |||||||||
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | |
A | ||||||||||||
B | 细胞对照（培育基） | 病毒对照（假病毒+培育基） | ||||||||||
C | ||||||||||||
D | ||||||||||||
E | ||||||||||||
F | ||||||||||||
G | ||||||||||||
H | ||||||||||||
3样品稀释：将多道电动移液器调至40μl移液和100μl混匀程序，对B4- B11孔中液体轻柔的重复吹吸8次充沛混匀，然后搬运40μl液体至对应的C4- C11孔，轻柔的重复吹吸8次后搬运至D4-D11孔，以此类推，从G4-G11孔中吸弃40μl液体。
5.2.4用DMEM培育基将假病毒稀释至200TCID50，于第B3-G11孔，每孔加120μl。
5.2.5将稀释板4℃放至1小时。
5.2.6从稀释板各孔中汲取100μl的假病毒血清混合物（或培育基）贴壁慢慢参加预先已铺好细胞的培育板对应孔中，轻拍培育板四周混匀。
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