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版块:机械制造   类型:普通   作者:化工产业技术分享   查看:93   回复:0   获赞:0   时间:2022-05-18 17:20:36

关于血清、腹水和组织培养上清的弄清,离心和过滤是根本的试验室技能。这些技能可以去除会堵塞层析柱的脂类和小颗粒物质。关于某些 样品,缓冲液置换和除盐也是必要的过程。硫酸铵沉淀作为更进一步的预处理过程,常常用于浓缩腹水中的免疫球蛋白。


抗血清


多克隆抗体一般是未经纯化的,称为血清或抗血清。抗血清是指现已除去了凝血蛋白和血红细胞的免疫宿主的血液。抗血清包含一切品种的 抗体/免疫球蛋白以及其它血清蛋白。它所包含的不只有辨认靶抗原的抗体,还有辨认非靶抗原的抗体,在免疫剖析中有时会发生非特异性反 应。因为这个原因,粗制抗血清一般要进行纯化,以去除血清蛋白,添加能特异和靶抗原相结合的免疫球蛋白的份额。


组织培养上清


单克隆抗体可以通过杂交瘤细胞培养(细胞排泄性抗体)并收成杂交瘤组织培养上清来取得。腹水单克隆抗体可以通过在小鼠(或大鼠)的腹腔中成长杂交瘤细胞而发生。杂交瘤细胞注射入小鼠今后,就会在小鼠腹腔繁衍并发生液体(腹 水)。这种腹水就包含了高浓度的可收成抗体,比杂交瘤细胞培养有更高的抗体产值。


抗体纯化


多克隆抗血清或单克隆腹水/组织培养上清一般通过下述三种办法中的一种来进行纯化:


1.蛋白A/G纯化


蛋白 A/G 纯化是使用金黄色葡萄球菌的蛋白 A 或链球菌的蛋白 G 对免疫球蛋白 Fc 段的高亲和性。蛋白 A/G 纯化从粗制抗血清中去除了血清 蛋白,但没有去除非特异的免疫球蛋白组分。成果蛋白 A/G 纯化的抗血清依然具有一小部分不等待的穿插反响性。


2.亲和纯化


亲和纯化便是通过类似性别离某一特定蛋白或具有类似特征的一组蛋白。这种别离蛋白的技能是根据在蛋白和耦合于层析介质上的特定配基 之间的一种可逆的相互作用。 抗原亲和纯化的优势是免疫球蛋白可以特异性地同影响它发生的抗原进行结合,成果消除了很多的非特异免疫球蛋白成分,将能特异与靶抗 原相结合的免疫球蛋白成分富集。因而亲和纯化后取得的主要是含所等待的特异性免疫球蛋白。


3.预吸附

多克隆抗体有时要通过预吸附。也便是说它们要被不同物种来历的其它蛋白或血清吸附,以消除或许的穿插反响的抗体。这样纯化后的抗体 纯度和特异性应很高,任何穿插反响都被明显削减。

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回复:抗体方式及抗体纯化

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