功能性的维生素-D首要包含维生素-D3和维生素-D2。维生素-D 除了具有传统意义上的骨骼效应，它还有着广泛的非骨骼效应，与心血管疾病、免疫疾病、糖尿病、肿瘤等疾病密切相关。25-羟基维生素-D（25OHD）测定是衡量维生素-D 养分状况的最佳目标。依据测定原理不同，现在 25OHD 的测定办法可分为多种，液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）具有特异性强、准确性高的特色，被认为是点评维生素-D 养分状况的“金规范”测定法，美国NIST的SRM972a规范参阅物质用于测定的校准品。

经过测定 25OHD 浓度来点评维生素-D 水平，现有多种办法用于临床 25OHD的测定，依据办法原理，可分为酶免疫剖析法和色谱法。因为一切的维生素-D羟化物都可能发生抗体抗原结合反响，因而酶免疫剖析法只能测定 25OHD 总量，无法一起测定 25OHD2和 25OHD3的浓度。现有 25OHD 的色谱剖析办法包含高效液相色谱法（HPLC）和液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）。因为可别离并检测不同的剖析物，色谱法可区别并能别离定量 25OHD2和 25OHD3。

色谱法可将 25OHD2、25OHD3与维生素-D其他代谢物完成有用别离，进步检测特异性。HPLC 是前期使用较多的色谱法之一，可一起检测 25OHD2和 25OHD3，具有杰出的精密度，与 LC-MS/MS 法成果一致性较好。与免疫法比较，HPLC的相对不确定度小，剖析本钱更低，乃至还有 HPLC 商业试剂盒用于 25OHD的测定。可是 HPLC 的不足之处是剖析时间长、检测通量小、灵敏度低、所需样品量大，不适合临床使用，现已彻底被 LC-MS/MS 所代替。

LC-MS/MS 是色谱法中最为常用的 25OHD 检测办法，样品经处理后选用液相色谱别离，检测器为串联质谱仪，在多反响监测扫描形式下，完成分子离子和碎片离子两次质量挑选，可一起检测 25OHD2和 25OHD3，具有十分高的检测特异性，被认为是“金规范”的检测技能。LC-MS/MS 愈加符合现代临床实验室的作业流程，可彻底满意临床检测办法准确性、特异性、检测通量的要求。25OHD 的 LC-MS/MS检测办法都是实验室内部开发的，不同的实验室选用不同的规范品来历、贮备液制造、样品处理办法等，影响了室间可比性。

而选用一起的校准品、参与英国维生素-D 代谢物室间质评方案(DEQAS)、美国病理学家协会（CAP）的才能测验等办法有助于改善办法间、实验室间测定成果的可比性：美国规范技能研究（NIST）所供给血清 25OHD2和 25OHD3的SRM972a规范参阅物质，选用 LCMS/MS 测定靶值。2009 年 DEQAS 有 35 国家、670 家实验室参与，现在我国尚无相应的 25OHD 的室间质评方案。