了解免疫剖析的根本原理很简略。根据抗体的免疫剖析体系的根本组成部分有三个：用于检测和定量的抗原；针对这种抗原的特异性抗体；以及丈量给定样本中抗原量的体系。尽管这似乎是一个十分简略的体系，但在许多情况下，为了快速方便地进行丈量，还需要许多其他剖析资料。下面就来看一下Enzo Life Sciences丨艾美捷的夹心ELISA&竞赛ELISA测定原理。

一、Enzo Life Sciences丨艾美捷免疫测定/夹心ELISA试剂盒

免疫测定剖析，也称为夹心ELISA（酶联免疫吸附试验），运用两种抗原特异性抗体捕获或“夹心”在孔中检测抗原。免疫计量剖析显现抗原浓度和底物反响之间存在直接相关性。免疫计量剖析一般运用涂在平板上的“捕获”抗体结合感兴趣的抗原。在第2次孵化期间，抗原被第二个抗体结合“检测”抗体，也是抗原的特异性抗体。检测抗体能够由二级抗体酶结合物结合，或许检测抗体自身是酶结合物。当向剖析中增加显色底物以显色时，抗原浓度高的样品比抗原浓度低的样品发生更多信号抗原浓度，发生与样本中抗原量成正比的信号。然后，这种相关性可用于从规范曲线揣度不知道样本中的抗原浓度。

二、Enzo Life Sciences丨艾美捷竞赛ELISA试剂盒

在竞赛性酶免疫剖析（EIA）中，样本中的抗原与与陈述酶结合的抗原竞赛有限的抗体结合位点。这就发生了抗原浓度和底物周转率之间的反比联络。竞赛性EIA一般运用一种针对小分子量抗原的抗体，一般小于10000道尔顿。在孵化过程中，抗原含量高的样品导致未符号抗原的结合量大于结合抗原。当向剖析中增加显色底物以显色时，抗原浓度高的样品发生的信号低于抗原浓度低的样品，从而在样品中的抗原浓度与剖析中的显色之间发生负相关。这种联络可用于从规范曲线揣度不知道样本中的抗原浓度。这种反响是为数不多的用于小分子量抗原（如类固醇、药物、脂质和肽）的办法之一。

左图：夹心ELISA试验：

将样品参加到包裹有捕获抗体的容器中，并孵育清洗微孔以去除未结合的分子增加检测抗体并孵育以与抗原结合，构成“三明治”铲除剩余的检测抗体参加二级抗体酶结合物并清洗。结合酶一般是辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）

注：假如陈述酶直接与检测抗体结合，则可省掉该过程增加底物并孵育以发生信号读板器中的丈量信号。

右图：竞赛ELISA试验：

将样品参加到涂有抗物种抗体的容器中酶结合抗原参加样品中，将捕获抗体参加培养皿中并孵育。样本中的抗原和酶结合抗原竞赛与捕获抗体的结合。包被在孔中的抗物种抗体结合捕获抗体。清洗微孔以去除剩余的抗体和酶结合抗原，增加基板以发生信号读板器中的丈量信号。

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