1. BCA法测定试剂盒

碱性条件下，蛋白将Cu2+复原为Cu+， Cu+与BCA试剂构成紫色彩的络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与规范曲线比照，即可核算待测蛋白的浓度。不方便的是这种办法需求提早制造规范曲线。BCA蛋白质测定办法活络度高，操作简略，试剂及其构成的色彩复合物安稳性俱佳。BCA办法适用于表面活性剂存鄙人的蛋白质浓度检测，可兼容高达5%的SDS，TritonX-100及Tween等。可是，因为BCA办法依托铜离子进行显色反响，假如溶液中含有与铜离子反响的螯合剂比方EDTA或许复原性试剂比方DTT、β-巯基乙醇，成果将遭到很大程度的影响。一起，BCA办法的检测成果也会遭到蛋白质内半胱氨酸，酪氨酸，色氨酸含量的影响。

2. Bradford法

该办法的原理是，带负电的考马斯亮蓝染料与蛋白质中碱性氨基酸相互作用。考马斯亮蓝在溶液中显赤色，吸收峰在465nm处，当与蛋白质结合后，其显蓝色，在595nm处有吸收峰。595nm处的吸光值与蛋白质的浓度呈正比。

Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5mM。但受略高浓度的去垢剂影响。需保证SDS低于0.1%，Triton X-100低于0.1%，Tween 20, 60, 80低于0.06%。

3. UV280法

这种办法是在280nm波长，直接测验蛋白。挑选Warburg 公式，光度计能够直接显示出样品的浓度，或许是挑选相应的换算办法，将吸光值转换为样品浓度。蛋白质测定进程十分简略，先测验空白液，然后直接测验蛋白 质。然后显得成果很不安稳。蛋白质直接定量办法，合适测验较纯洁、成分相对单一的蛋白质。紫外直接定量法相关于比色法来说，速度快，操作简略；可是简单受 到平行物质的搅扰，如DNA的搅扰；别的敏感度低，要求蛋白的浓度较高。

1）简易经历公式

蛋白质浓度(mg/ml) = [1.45*OD280-0.74*OD260 ] * Dilution factor

2）准确核算

经过核算OD280/OD260的比值，然后查表得到校对因子F，再经过如下公式核算终究成果：

蛋白质浓度(mg/ml) = F *(1/d) *OD 280 * D

其间d为测定OD值比色杯的厚度

D为溶液的稀释倍数

4. Lowry法

蛋白质在碱性溶液中其肽键与Cu2+螯合，构成蛋白质一铜复合物，此复合物使酚试剂的磷钼酸复原，产生蓝色化合 物，在必定条件下，使用蓝色深浅与蛋白质浓度的线性关系作规范曲线并测定样品中蛋白质的浓度。

5、考马斯亮蓝（Coomassie Brilliant Blue）法

考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度，是使用蛋白质―染料结合的原理，定量的测定微量蛋白浓度的快速、活络的办法。

考马斯亮蓝G―250存在着两种不同的色彩方式，赤色和蓝色。它和蛋白质经过范德华力结合，在必定蛋白质浓度规模 内，蛋白质和染料结合契合比尔规律（Beer’s law）。此染料与蛋白质结合后色彩有赤色方式和蓝色方式，最大光 吸收由465nm变成595nm，经过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。

蛋白质和染料结合是一个很快的进程，约2min即可反响彻底，出现最大光吸收，并可安稳1h，之后，蛋白质―染料复 合物产生聚兼并沉积出来。蛋白质―染料复合物具有很高的消光系数，使得在测定蛋白质浓度时活络度很高，在测定 溶液中含蛋白质5µL/ml时就有0.275光吸收值的改变，比Lowry法活络4倍，测定规模为10-100µg蛋白质，微量测定 法测定规模是1－10µg蛋白质。此反响重复性好，准确度高，线性关系好。规范曲线在蛋白质浓度较大时稍有曲折， 这是因为染料自身的两种色彩方式光谱有堆叠，试剂布景值随更多染料与蛋白质结合而不断下降，但直线曲折程度很 轻，不影响测定。

此办法搅扰物少，研讨标明：NaCl，KCl，MgCl2，乙醇，（NH4）2SO4无搅扰。强碱缓冲液在测定中有一些色彩 搅扰，这能够用恰当的缓冲液对照扣除其影响。Tris，乙酸，2―巯基乙醇，蔗糖，甘油，EDTA及微量的去污剂如 Triton X―100，SDS，玻璃去污剂有少数色彩搅扰，用恰当的缓冲液对照很简单除去。可是，很多去污剂的存在对 色彩影响太大而不易消除。