前语：脂质组学归于新式研讨范畴，其中心作业是生物体系中各种脂类物质的表征和定量剖析。质 谱法是否可以成功检测和判定出给定样品中的数千种潜在脂质，将直接取决于脂质液相色谱别离的战略。 肝脏、脑、心脏安排提取物是脂质组学研讨中常见的生物样品。为证明色谱对脂质组学剖析 的影响，本运用简报以肝脏安排提取物为例，总结了运用反相 (RP) 和正相 (NP) 色谱别离不 同类型脂质的优势。 本研讨作业选用 Agilent UHPLC 1290液相色谱体系（包括二元泵、多孔板主动进样器和柱温箱）进 行。液相色谱经过安捷伦喷射流接口与 Agilent 6540 Q-TOF 联用。选用反相和正相色谱两种 办法别离安排提取物。

• 肝脏总脂质提取物购自 Avanti Polar Lipids 公司（亚拉巴马州阿拉巴斯 特），脂质成分组成见上图

• 将冻干的脂质提取物复溶于 2:1 氯仿/ 甲醇溶液，然后用活动相 A 稀释至 200 ng/µL

• 进样量 5 µL（含 1 µg 提取物），进 行反相或

剖析作业流程中数据剖析的第一步是从成果 中提取分子特征，该特征由保存时刻和质量 数确认。此特征将化合物的一切特定加合物 和同位素的丰度浓缩为单个化合物的丰度。 分子特征提取由 Agilent MassHunter 定性 剖析软件（版别 B.07.00）经过 Agilent 分 子特征提取器 (MFE) 算法进行，脂质标示 经过 Agilent METLIN 脂质 PCDL (B.07) 和 SimLipid 软件（版别 4.20，PREMIER Biosoft 公司，加利福尼亚州帕罗奥图）进 行。METLIN 脂质 PCDL 包括 640 张经过化学规范品取得的 MS/MS 谱图。SimLipid 软件支撑脂质谱图的 MS/MS 理论匹配且包 含 36,224 个脂质条目。

成果与评论 咱们选用 MFE 算法对反相色谱法别离的肝 脏脂质提取物进行剖析，得到了 4,108 种提 取化合物（特征）。然后咱们在 METLIN 数据库中查找化合物，得到 1,000 余种带有 脂质标示的化合物，单次液质联用剖析仅耗 时 38 分钟（图 1）。

与依据亲脂性（首要由碳链长度和双键数确 定）的反相色谱脂质别离比较，正相色谱分 离首要依据脂质头基的极性。图 3 标明正相 色谱关于偏极性的脂质和带电脂质的别离非 常高效。但会丢失中性脂质（如甾醇类、二酰甘油类和三酰甘油类），由于运用这类 活动相时中性脂质不能得到色谱保存。关于 可以检测到的化合物，用户可依据已知的脂 质分类特征查找相应的方针数据库，从而提 高脂质标示的准确度。例如，咱们可以将搜索规模约束在 PE 脂质中，具体办法有：在 限制的保存时刻窗口中查询洗脱化合物；仅 查找 METLIN 脂质 PCDL 中 PE 子集下的 PE 条目或进行自定义的 SimLipid 查找。

表 1 所示为不同数据库的查找成果，数据 文件来自相同肝脏安排提取物在不同色谱法 和离子源条件下的剖析。咱们选用 MFE 算 法处理仅经过四极杆 1 获取的数据文件。 所得化合物依据 METLIN 脂质 PCDL 标 注，也可以运用 SimLipid 软件标示。为 完成高准确度的脂质标示，咱们也对主动 MS/MS 数据文件进行了 MFE 算法处理， 但只要含 MS/MS 数据的化合物才干用于数 据库查询。可运用 METLIN 脂质 PCDL 通 过谱库匹配标示化合物，也可以运用仅依据 MS/MS 数据的 SimLipid 软件进行标示。

要点留意：与 METLIN PCDL（经过牢靠 化学规范品取得的高质量专业谱库）标示不 同，SimLipid 标示是将 MS/MS 谱图与理 论模仿生成的 MS/MS 碎片谱图进行匹配。 以上示例标明剖析人员可对色谱法进行优化 以用于不同类型脂质的剖析，反相和正相液 质联用体系在脂质组学剖析中具有各自的选 择性优势。反相液质联用体系的适用规模更 加全面，可以别离多种不同类型的脂质，实 现更多特征的检测和标示。别的，保存时 间具有很好的重现性，有助于色谱比对和差 异剖析作业流程。正相液质联用体系的优势 在于可以依据极性脂类的特征保存行为，对 其进行更高准确度的标示。此外用户还可以 敏捷经过色谱图把握样品间脂质品种的全体 差异。

定论：本文验证了色谱法对杂乱生物样品中多品种 型脂质进行全面检测和剖析的才能。咱们将 脂质特异 UHPLC 办法与具有宽动态检测范 围的准确质量 Q-TOF 联用，并合作运用先 进的特征查找软件进行主动化脂质数据库搜 索，完成了在单次液质联用剖析中检测和标 注出 1,000 余种脂质。剖析人员可对色谱方 法开发进行优化，以靶向剖析不同类型的脂 质，如咱们运用两种可选的液相色谱别离方 法 — 反相色谱和正相色谱对肝脏安排提取 物进行的别离所示。从脂质组学剖析的视点 来看，这两种办法具有各自的选择性优势， 可使脂质检测掩盖愈加深化、全面。